Triatoma virus: Desarrollo de un ELISA para su detección, prevalencia y distribución en Triatominos en Argentina.

MARTI G. A; GONZALEZ E. T; GARCÍA J. J; ECHEVERRÍA M. G

Bueneos Aires, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología

  Los triatominos constituyen un eslabón muy importante en la transmisión de Tripanosoma cruzi. La enfermedad de Chagas es una zoonosis endémica del continente Americano que afecta  a 2.300.000 Argentinos. El Triatoma virus (TrV), único virus entomopatógeno hallado en triatominos hasta el presente esta constituido por un 35% de ARN y 65% de proteínas, las partículas carecen de envoltura y tiene un diámetro de 30 nanómetros aproximadamente. Este virus pertenece a una nueva familia denominada Dicistroviridae. El objetivo de este trabajo es determina  la prevalencia y distribución en Argentina de TrV mediante la elaboración de un método para la determinación de infección sensible y especifico  (ELISA de captura) utilizando intestinos y/o materia fecal de triatominos. Se realizó la purificación de partículas virales a partir de intestinos de Triatoma infestans para la producción de antisueros en conejo y gallina. Posteriormente se realizó la confirmación de las partículas por electroforesis en SDS-PAGE. Los anticuerpos obtenidos en conejo y gallina fueron evaluados por inmunodifusión en agar e inmunoblotting (técnicas estandarizadas en nuestro laboratorio). Para la realización del ELISA de captura, se optimizaron e primer lugar la dilución de los reactivos a utilizar. El valor de corte de la prueba se determino analizando el material proveniente de 50 insectos libres de TrV (colonia CEPAVE). Para cada placa el cálculo establecido fue: X(p)-X(-)/X(+)-X(-): siendo X(p) el valor promedio de las muestras problema, X(+) el valor del promedio del control positivo y X(-) el valor promedio del control negativo. Los valores hallados para la población negativa siguieron una distribución normal con lo cual el valor de corte de la prueba se determinó como la media más tres desvíos estándar (99% de certeza respecto a la positividad de los valores que dieron por encima del valor de corte- 0.2-). La titulación de los reactivos se estableció en 1:300, 1:4, 1:400 y 1:3000 para el anticuerpo de gallina anti-TrV, los contenidos intestinales y la materia fecal, el suero de conejo anti-TrV y el conjugado anti-conejo, respectivamente. Los tiempos de lectura se optimizaron en 15 minutos. Se analizaron un total de 1646 triatominos obtenidos de trece provincias siendo la prevalencia 8.21% (n=136). La presencia de TrV en triatominos fue detectada en 10 (16%) de las 62 poblaciones analizadas. Los triatominos infectados con TrV fueron recolectados en siete provincias aunque 4 de las 10 poblaciones con TrV fueron capturadas en la provincia de La Rioja con el 26.4% de los ejemplares positivos. La prevalencia de Trv en las poblaciones de T. infestans positivas varió entre 5.77 y 25%, siendo positivo el único ejemplar de T. sordida capturado en un domicilio de la provincia de Chaco. Conclusión: el ELISA de captura diseñado para el diagnóstico de TrV en tubos digestivos o en materia fecal de triatominos mostró especificidad frente al TrV, corroborada mediante el uso de insectos negativos a TrV por microscopia electrónica. En nuestra experiencia es una herramienta muy valiosa, rápida y sensible para la detección de positividad en los triatominos de campo. Triatoma virus presentó una prevalencia global de 8.21% y un amplia distribución habiéndose hallado en 7 de las trece provincias examinadas (nueve poblaciones de T. infestans recolectadas en seis provincias y una de T. sordida en la provincia del Chaco). Este virus no presentó variación estacional marcada, habiendo sido detectado en triatominos recolectados durante las cuatro estaciones. Estos resultados abren las puertas a futuras investigaciones para estudiar la circulación viral en triatominos que ocupan el domicilio, peridomicilio y ecotopos silvestres.