Desarrollo de un sistema de expresión en esporas de Bacillus subtilis de antígenos de Leishmania candidatos para inmunoprofilaxis de leishmaniasis

ACUÑA L; SANCHEZ-VALDEZ F; ORTIZ MOYANO R; BASOMBRÍO MA; HASHIGUCHI Y; MARCO D; BELLOMIO A

Mar del Plata

Congreso; X Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2014

La leishmaniasis tegumentaria Americana (LTA), es una enfermedad endémica enArgentina para la cual no existen vacunas de aplicación en humanos. Las esporasbacterianas, como modelo de exposición de proteínas, podrían ser una alternativa válidapara la formulación de vacunas. Con el objetivo de obtener un sistema de exposición deantígenos en la superficie de las esporas de Bacillus subtilis, se realizó una fusióntranscripcional entre CotB (una proteína de la capa externa de la espora de B. subtilis) yLbAg3, una proteína inmunogénica de Leishmania (V.) braziliensis, agente causal de LTA.El gen estructural de CotB se amplificó por PCR a partir de B. subtilis 168 yposteriormente se reamplificó utilizando cebadores específicos que incorporan unapequeña región de clonado múltiple hacia el extremo 3?. El amplicón se clonó en elplásmido pRSETa. La región del gen que codifica para LbAg3 se amplificó a partir de unacepa de L. (V.) braziliensis MHOM/AR/03/OLO1 y posteriormente se reamplificó,adicionando hacia el extremo 3? un sitio de restricción XmaI, una secuencia que codificapara seis residuos de histidina y un sitio de restricción BamHI. Este amplicón se clonó acontinuación de cotB. La fusión génica obtenida cotB-polylinker-lbAg3-6His se digirió conlas enzimas HindIII y BamHI y se clonó en el vector de integración pDG364 obteniendo elplásmido denominado pSPOK. La expresión eficaz de la proteína heteróloga en lasuperficie de la espora y su estabilidad están en proceso de evaluación. La seguridad,estabilidad a temperatura ambiente y fácil manipulación de las esporas de B. subtilis, hacea este sistema de expresión particularmente útil para la expresión en la superficie demoléculas bioactivas como antígenos recombinantes capaces de disparar una respuestainmune protectiva.