Prospección y caracterización de genes que se expresen en semilla de Girasol.

ZAVALLO D.; PELUFFO L; LIA V.V.; HOPP HE; LOPEZ BILBAO M.; HEINZ RA

Viña del Mar, Chile

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria. REDBIO; 2007

REDBIO

La identificación de promotores, que definan un patrón de expresión espacio-temporal específico es fundamental para la generación de plantas transgénicas  en la producción de compuestos farmacéuticos y alimentos nutracéuticos, siendo las semillas un “embalaje” muy conveniente para este fin. Se propuso como objetivo de trabajo buscar promotores capaces de dirigir la expresión de transgenes en semillas de girasol. Los genes candidatos elegidos son el gen Ha-LTP5, que codifica para una proteína de transferencia de lípidos, el gen FAD2-1 que codifica para una oleato desaturasa de girasol, y un gen correspondiente a EST que por análisis comparativo de secuencias presenta similitud con una nsLTP. Se realizó un perfil de abundancia de transcriptos basado en la técnica de RT-PCR con iniciadores específicos para amplificar cada secuencia candidata. Para determinar la especificidad de la expresión de estos genes candidatos se analizaron distintos órganos de la línea HA89: hoja (H) y tallo (T) de planta adulta, botón floral en estadio (R1), (R2) y (R3) y semilla madura (S). En los ensayos de RT-PCR no se observó amplificación en los órganos vegetativos para ninguno de los tres genes. El gen Ha-LTP5 solo presenta expresión en semilla (S) mientras que los genes FAD2-1 y nsLTP también lo hacen en los estadios de botón floral. La expresión específica en semilla (S) del gen Ha-LTP5 lo posiciona como candidato para los objetivos del trabajo. Sin embargo los otros genes evaluados, al expresarse durante el desarrollo floral y en semilla resultan interesantes para el aislamiento y caracterización de su región promotora ya que podrían estar involucrados en el  periodo de llenado de grano. Para determinar tanto el momento del desarrollo como la extensión de la etapa  de expresión de estos genes y así poder establecer una asociación con el periodo de llenado de grano, es necesario evaluar un número mayor de estadíos de desarrollo. Una vez determinados estos genes candidatos se relevará una genoteca de girasol construída en BACs. Los clones BAC positivos se caracterizarán, subclonarán y secuenciarán para la identificación de las regiones promotoras, trabajo que se está realizando en paralelo con esta caracterización de genes.