Producción de apo AIy unión de VLDL en células Hep-G2en cultivo.

FORCATO, DIEGO OSCAR; SAMPEDRO, MARIA CECILIA; KIVATINITZ, SILVIA CLARA

Bahía Blanca, Argentina

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

  Se cultivaron células de hepatocarcinoma humano Hep G2 hasta llegar a un 80-90% de confluencia a distintos tiempos en medio de cultivo con y sin el agregado de aceite de pescado enriquecido con ácidos grasos W-3 insaturados, ácido linoleico y fosfatidilcolina. Se analizó la acumulación de Apolipoproteína AI en el medio de cultivo y la unión de VLDL a las células por citometría de flujo. Se encontró que los lípidos aumentaron la concentración de Apo AI en el medio tanto a las 8 hs (1, 2 y 4 veces, respectivamente) y a las 24 hs (2,25; 2 y 10 veces, respectivamente) con respecto al control, mientras que el aceite de pescado peroxidado no produjo cambios. También se analizó la unión de VLDL marcada con el fluorescente Alexa en células preincubadas con estos lípidos. Se determinó que la VLDL se une a 2 sitios distintos en células Hep G2. El aceite de pescado aumenta la unión al sitio 1 mientras que el aceite de pescado peroxidado aumenta la unión al sitio 2 en células quiescentes. El mismo análisis se realizó preincubando las células con fosfatidilcolina, sin que se apreciaran cambios con respecto al control. Experimentos de inhibición de la unión de VLDL marcada con Proteína Asociada al Receptor (RAP) y un anticuerpo anti-Receptor de VLDL mostraron que sólo uno de estos sitios de unión  presenta las características de receptor de VLDL, por Ej. la unión es desplazable por otros ligandos. También se evidenció que el sitio de unión de VLDL no desplazable se expresa pobremente en células mitóticas. Estudios más detallados se están llevando a cabo para dilucidar el mecanismo por el cual estos lípidos aumentan la acumulación de Apo AI y la unión de VLDL a las células hepáticas.