La progesterona secretada por las celulas del cumulus atrae quimiotácticamente alos espermatozoides de conejo

GUIDOBALDI, HA; TEVES, ME; UÑATES, DR; GIOJALAS, LC

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XX Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH); 2007

Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana

En mamíferos, el comportamiento quimiotáctico de los espermatozoides hacia el fluido folicular (FF) se observó en humano, ratón y conejo. La progesterona (principal esteroide del FF y del cumulus oophorus), a bajas concentraciones atrae quimiotácticamente a los espermatozoides de humano y conejo. Recientemente, se observó en humanos que el ovocito y las células del cumulus liberan quimioatractantes de identidad desconocida. El objetivo de este trabajo fue identificar en un modelo animal, el conejo, la fuente e identidad del atractante para los espermatozoides. Metodología: Las hembras de conejo fueron apareadas para estimular el crecimiento de los folículos ováricos, y a las 9 h postcoito (previo a la ovulación) los ovarios fueron removidos quirúrgicamente. A continuación, los complejos ovocito-cumulus se extrajeron por punción de los folículos bajo lupa. A algunos de ellos se les retiraron las células del cumulus, incubando por separado en placas multiwell los complejos ovocito-cumulus (COC), las células del cumulus (CUM), y los ovocitos (OVO) durante 48 h en medio de cultivo M199 a 37 °C. Los ensayos de quimiotaxis se realizaron con espermatozoides capacitados de conejo, en una cámara de Zigmond modificada, enfrentados a distintas diluciones de los medios condicionados, utilizando como control positivo al FF bovino (1:104), y al medio BWW y M199 como control negativo. El porcentaje de espermatozoides orientados quimiotácticamente se determinó por videomicroscopía y análisis computarizado de imágenes. Resultados y conclusiones: La mayor actividad quimiotáctica se observó en presencia de un gradiente de concentración generado por 0,1 COC/ml y 1 CUM/ml (p<0.05), en valores similares al control positivo (FF), mientras que el medio condicionado de OVO no mostró efecto quimiotáctico significativo en ninguna de las diluciones estudiadas. Los espermatozoides capacitados previamente incubados con concentraciones crecientes del anticuerpo contra el receptor de progesterona (1:5000, 1:500, 1:50) se enfrentaron a medio condicionado de 0.1 COC/ml, observándose que la mayor concentración del anticuerpo inhibió la respuesta quimiotáctica de los espermatozoides hacia el COC. La presencia de progesterona se detectó por quimioluminiscencia en el COC (20 ng/COC/ml) y en el CUM (5ng/CUM/ml). Estos resultados sugieren que, al menos en el conejo, la progesterona producida y secretada por las células del cumulus. es la responsable de orientar quimiotácticamente a los espermatozoides en dirección al ovocito.