Dominios funcionales de apolipoproteína A-I humana involucrados en la movilización del colesterol intracelular en células de ovario de hamster chino

GONZALEZ, M. C.; TOLEDO, J. D.; TRICERRI, A. Y GARDA, H.

Bahía Blanca, Argentina

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INIBIBB), Universidad Nacional del Sur (UNS), CONICET

  La apolipoproteína A-I (apoAI) es la apoproteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL) y juega un rol clave en remover colesterol (CO) de tejidos periféricos. Al interactuar con la membrana celular, apoAI desencadena la movilización de depósitos intracelulares de CO como aquel disponible para esterificación por acil-CoA aciltransferasa (ACAT). Demostramos anteriormente que dos hélices centrales de apoAI con una distribución particular de cargas (tipo Y) en su cara polar se inserta exclusivamente en membranas artificiales y promueve la desorción de CO. Aquí investigamos el rol de este dominio en movilizar CO celular. Utilizamos células CHO para comparar la actividad de remover CO, disminuir el pool disponible a ACAT, e incrementar el CO en la membrana plasmática de: a) apoAI de suero, b) un péptido (AI 77-120) con la secuencia del dominio central, c) un mutante natural con una deleción puntual en el dominio central (AI 0@K107), y d) un mutante cuyas dos hélices centrales fueron reemplazadas por las hélices Y del extremo C (AI H10@H4). Los resultados con AI 77-120 indican que las hélices centrales son suficientes para movilizar el CO intracelular y promover su remoción. AI H10@H4 retiene esta actividad, indicando que no se requiere una secuencia específica sino una distribución de cargas tipo Y en la cara polar. La deleción de lisina 107 no tiene efecto sobre la capacidad de aceptar CO, pero elimina la capacidad de movilizar el CO intracelular que podría atribuirse al cambio de orientación de las caras hidofóbica e hidrofílica de la hélice. También se estudió la influencia del estado de lipidación de apoAI sobre estas respuestas celulares utilizando HDL reconstituídas de diferente tamaño. Los resultados indican que aunque éstas son menos efectivas que apoAI libre para captar el CO celular, tienen la misma capacidad para movilizar CO hacia la membrana plasmática.