Identificación y caracterización de nuevos genes codificantes de toxinas Cry en cepas de Bacillus thuringiensis

BERÓN, C.; SALERNO, G.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; BairesBiotec. Congreso Internacional-Grupo Biotecnología. VI Simposio Nacional de Biotecnología-REDBIO 2005. Encuentro Trinacional REDBIO Argentina–Chile-Uruguay.; 2005

REDBIO-Grupo Biotecnología

Una de las alternativas más promisorias al uso de insecticidas químicos es el empleo de microorganismos entomopatógenos en el control de insectos dañinos. Entre éstos, la bacteria Bacillus thuringiensis, ha resultado tener un importante efecto insecticida y a su vez presentar una alta especificidad. Su acción tóxica está determinada básicamente por la presencia de una o más proteínas de tipo Cry, formadoras de cristales (Joung y Côte, 2000). La mayoría de las proteínas Cry descriptas presentan su actividad principalmente sobre insectos de los Ordenes Lepidoptera, Coleoptera y Diptera. La necesidad de identificar nuevas proteínas Cry con un espectro de acción más amplio y/o de mayor toxicidad que el ya conocido, y que por otro lado sean una alternativa a la emergencia de resistencias por parte de los insectos, promueve a la búsqueda continua de cepas de B. thuringiensis y al diseño de nuevas estrategias para detectar nuevos genes codificantes de toxinas novedosas. Se han propuesto metodologías basadas en la PCR, para la identificación de nuevas toxinas (muchas de ellas del tipo de PCR múltiplex) que están en general enfocadas a identificar genes o familias de genes cry más comunes y abundantes en la naturaleza, y por lo tanto, la identificación de la presencia de genes nuevos es a partir de la ausencia de productos de amplificación (Porcar y Juárez-Pérez, 2003). En este trabajo se utilizó una estrategia metodológica novedosa que, a partir del diseño de oligonucléotidos universales, utiliza dos pasos sucesivos de PCR, permitiendo la amplificación de secuencias desconocidas relacionadas a secuencias de genes cry que posteriormente son caracterizadas por la secuenciación del fragmento de ADN amplificado (Berón et al, 2005). La estrategia usada permitió obtener secuencias de genes homólogas a genes cry presentes en cepas nativas y cuya amplificación no fue posible lograr mediante la utilización de cebadores descriptos en trabajos publicados con anterioridad. En particular se caracterizó una toxina tipo Cry, aislada a partir de una cepa de B. thuringiensis con actividad contra larvas de lepidópteros, cuya particularidad es la gran divergencia respecto de las familias de estas proteínas y permitiendo determinar que se trata de una nueva familia de proteínas Cry (Cry48).