Desarrollo de ddRAD-seq para el estudio de la estructura poblacional y urbanización de Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) de la provincia de San Juan

PICCINALI, RV; SÁNCHEZ LORIA, J; POKLEPOVICH, T; RODRIGUERO, MS; CANO, F; MANTECA-ACOSTA, M; CARBAJAL DE LA FUENTE, AL; CAMPOS, J

La Plata

Congreso; V Reunión Argentina de Biología Evolutiva; 2023

Sociedad Argentina de Biología Evolutiva

El Chagas es una problemática de salud compleja, históricamente asociada al ambiente rural. Sin embargo, estudios recientes muestran procesos de urbanización en distintas especies de triatominos, los insectos vectores de la enfermedad. En consecuencia, el Chagas urbano se erige como un desafío de características propias y particulares del modo de vida en los aglomerados urbanos. La provincia de San Juan está catalogada como de alto riesgo de transmisión de la enfermedad de Chagas, mostrando altos niveles de infestación urbana por Triatoma infestans, el principal vector en nuestro país. Desde el año 2017 existe un proyecto colaborativo entre autoridades de salud, equipos técnicos, investigadores y la comunidad, con el fin de comprender los determinantes sociales, culturales y eco-epidemiológicos que favorecen la presencia de T. infestans en las zonas urbanas y suburbanas e implementar estrategias efectivas de control vectorial. Dentro de este proyecto, surgen preguntas importantes sobre el origen de los triatominos urbanos, cómo se estructura la variación a nivel espacial y temporal, qué procesos están involucrados, cuál es la conectividad entre poblaciones rurales y urbanas y si los insectos urbanos muestran huellas de adaptación a la vida en este nuevo ambiente. La técnica de ddRAD-seq permite encontrar un gran número de SNPs a una escala genómica y generar marcadores para estudiar este tipo de preguntas. En este trabajo realizamos simulaciones in silico con el paquete de R simRAD y un piloto experimental para poner a punto la técnica de ddRAD-seq en T. infestans. En la simulación in silico, de las 9 combinaciones de enzimas de corte probadas, la mejor fue Mbol – PstI seguida de Mbol – EcoRI. Ambas combinaciones se probaron en extracciones de ADN de las patas y los músculos alares en 2 individuos de áreas urbanas de San Juan, uno del departamento Chimbas y otro del departamento Santa Lucía. En la prueba de laboratorio el mejor tejido fue el proveniente de las patas y la mejor combinación de enzimas fue Mbol – PstI. Se confeccionaron las bibliotecas de ddRAD-seq desde este tejido y esta combinatoria de enzimas, y se secuenciaron en el equipo Illumina Novaseq 6000. Las secuencias obtenidas se analizaron con el programa STACKS, usando un genoma de referencia de T. infestans disponible en Genbank. Se obtuvo un total de 63853 loci secuenciados, los cuales cubrieron 14783620 sitios. Un total de 47119 sitios fue variable. Los resultados obtenidos son muy prometedores para el desarrollo y validación de la técnica ddRAD-seq para estudios de estructura poblacional y adaptación en este insecto vector de la enfermedad de Chagas.