EL INSULTO OXIDATIVO ACTIVA LA VÍA DE LA PI3K/AKT EN SINAPTOSOMAS DE CORTEZA CEREBRAL DE RAT

URANGA, ROMINA; MATEOS, MELINA; GIUSTO, NORMA; SALVADOR, GABRIELA

Villa Giardino, Cordoba

Taller; VII Taller de Neurociencias; 2005

Taller de Neurociencias

Las sinapsis constituyen el sitio donde se desencadenan múltiples vías de  transducción de señal que participan en la regulación de la plasticidad neuronal y la supervivencia en sistema nervioso central. Así mismo se ha comprobado que en las sinapsis ocurren las primeras manifestaciones implicadas en diversas enfermedades neurodegenerativas El objetivo de nuestro trabajo fue identificar componentes de la vía de la PI3K en sinaptosomas de corteza cerebral de rata. Estudios de Western Blot utilizando anticuerpos dirigidos contra la subunidad regulatoria p85 de la PI3K nos permitieron identificar una proteína de aproximadamente 90 kDa de PM en sinaptosomas metabólicamente activos. Del mismo modo, pudimos determinar la presencia de la quinasa Akt en este sistema. Para evaluar si el stress oxidativo provocaba algún efecto sobre la vía en estudio trabajamos con sinaptosomas metabólicamente activos y  expuestos a condiciones de stress oxidativo inducido por FeSO4 a distintos tiempos de incubación. La presencia de FeSO4 incrementó los niveles de proteínas fosforiladas en tirosinas. También observamos un aumento en la fosforilación de Akt en condiciones de injuria oxidativa. Paralelamente se realizaron ensayos de incorporación de glutamato para evaluar el estado  metabólico de los sinaptosomas en las distintas condiciones de incubación. Mientras en los sinaptosomas controles el glutamato incorporado se mantuvo constante en el tiempo de incubación, la presencia de FeSO4 provocó una disminución en la captación del aminoácido en función del tiempo. Utilizando ATP[g-32P], evaluamos la actividad de la PI3K en las condiciones anteriormente descriptas. Pudimos determinar que la fosforilación del fosfatidilinositol fosfato se incrementó en un 42 % en los sinaptosomas sometidos al insulto oxidativo. Este efecto logró revertirse en presencia de inhibidores específicos de la PI3K tales como wortmanina y LY294002. Nuestros resultados demuestran que bajo condiciones de stress oxidativo se activa la vía PI3K/Akt en terminales sinápticas aisladas.