. Caracterización de una población célular altamente indiferenciada provenientes de epitelio pigmentario de retina bovina. Posibles implicancias en la degeneración macular

RODRIGUEZ DIEZ, G.; GIUSTO, N; SALVADOR, G

Buenos Aires

Congreso; Reunion Anual de la SOciedad Argentina de In=vestigacion en Vision y Oftalmologia; 2014

AIVO

Caracterización de una población célular altamente indiferenciada provenientes de epitelio pigmentario de retina bovina. Posibles implicancias en la degeneración macularCharacterization of poorly differentiated cells obtained from bovine retinal epithelium. Probable implications for macular degenerationRodríguez Diez, G., Giusto, N.M., Salvador G.A.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca- CONICET- UNS rodriguezdiez@criba.edu.ar OBJETIVOSEl objetivo del presente trabajo de investigación fue caracterizar un tipo celular obtenido a partir del epitelio pigmentario (EP) de retina bovina, el cual presenta características de pluripotencialidad, y a su vez evaluar la respuesta de dichas células frente al estrés oxidativo inducido por sobrecarga de hierro (Fe). MÉTODOSEl cultivo de células altamente indiferenciadas (EPi) se aisló a partir del EP de la retina bovina utilizando la metodología descripta para obtener cultivos primarios a partir de este tejido. Luego de 15 dias de obtenido el cultivo primario, logramos aislar un tipo celular con características de células inmaduras, que fue caracterizado con diferentes marcadores de pluripotencialidad. A su vez, y debido la implicancia de la acumulación de Fe en pacientes con degeneracion macular (DM), las células fueron expuestas a un ambiente pro-oxidante en presencia de distintas concentraciones y tiempos con citrato amónico férrico (FAC). La injuria oxidativa y la evolución del cultivo de EPi fueron evaluadas mediante diversas técnicas: reducción del MTT, generación de TBARS, liberación de LDH y presencia de marcadores de pluripotencialidad y de estrés oxidativo mediante western blot ,y microscopia de contraste de fase y de fluorescencia.RESULTADOS Los cultivos de EPi expresaron marcadores de células altamente indiferenciadas como SOX2 y SOX10, y nestina así como también marcadores de proliferación tales como β-catenina, y proteínas implicadas en el ciclo celular como ciclina D1, PCNA, mcm-2 y c-Jun. Por otro lado, estas células expresaron marcadores de cresta neural tales como vimentina y GFAP. Asimismo la incubación en condiciones de sobrecarga de Fe, provocó un marcado incremento en los niveles de peroxidación lipídica, acompañado de un leve incremento de la permeabilidad de la membrana plasmática y una ligera pérdida de la viabilidad mitocondrial. Estos cambios fueron acompañados con el aumento de la expresión de la ferritina, y de proteínas de respuesta al insulto oxidativo, tales como la NQO1 y TRx. CONCLUSIONES A partir de EP de retina bovina se pueden aislar células altamente indiferenciadas que responden a la sobrecarga de Fe incrementando los niveles de ferritina y manifestando resistencia al insulto oxidativo. Dichas células podrían considerarse una estrategia terapéutica de reemplazo en enfermedades degenerativas de la retina.