PRESENCIA DE LA VÍA FOSFOLIPASA C ESPECÍFICA PARA FOSFATIDILCOLINA EN SINAPTOSOMAS DE CORTEZA CEREBRAL DE RATA

MELINA MATEOS; ROMINA URANGA; GABRIELA SALVADOR; NORMA GIUSTO

Bahia Blanca

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

INIBIBB

La fosfatidilcolina (PC) juega un rol fundamental en mecanismos de señalización intracelular siendo fuente de segundos mensajeros lipídicos tales como ácido fosfatídico (PA), ácido araquidónico (AA) y diacilglicérido (DAG). El DAG generado a partir de PC puede provenir de  la vía de la fosfolipasa D y de la fosfohidrolasa de PA (PLD/PAP) o a través de la acción de una fosfolipasa C específica para PC (PC-PLC). La PC-PLC es una de las vías de señalización lipídicas menos exploradas en sistema nervioso central. Nuestro objetivo fue estudiar la presencia de dicha vía en sinaptosomas (Syn) de corteza cerebral (CC) de  ratas adultas de la cepa Wistar. En este sistema experimental pudimos determinar la actividad de  una fosfolipasa C capaz de hidrolizar PC y generar DAG. La generación de DAG se vio aumentada en presencia de distintas concentraciones de detergentes como el Tritón X-100 y el Deoxicolato de Sodio, siendo máxima en presencia de Tritón X-100 0,1%. Para discriminar la naturaleza del DAG generado a partir de PC, se utilizó etanol como marcador de la vía de la PLD y un inhibidor específico de la PC-PLC, D609. En estas condiciones experimentales demostramos que el 40% del DAG generado proviene de la vía PLD/PAP mientras que el 60% es producto de la vía PC-PLC. La PC-PLC presentó un Km aparente para dipalmitoil fosfatidilcolina de 350 mM y su actividad específica fue 4,6 veces mayor en la fracción de membrana plasmática sinaptosomal (SPMs), demostrando que esta enzima es predominantemente de membrana. Ensayos de Western Blot utilizando un anticuerpo policlonal dirigido contra la PC-PLC de Bacillus cereus mostraron una banda de 68 kDa en la fracción sinaptosomal de CC de rata. Mediante estos resultados pudimos demostrar la presencia de la PC-PLC en Syn de CC de rata. La existencia de esta vía en sistema nervioso central abre interesantes expectativas para el estudio de la implicancia de la misma en procesos de transducción de señal neuronal. Subsidiado por Secretaría General de Ciencia y Tecnología UNS, ISN, CONICET y FON