Vías de señalización involucradas en la respuesta inflamatoria inducida por el lipopolisacárido bacteriano en las células del epitelio pigmentario de la retina.

MATEOS, M; GIUSTO, N.; SALVADOR, G.

Buenos Aires

Congreso; Reunion Anual de AIVO; 2012

AIVO

E-mail: mvmateos@criba.edu.ar OBJETIVOS: Los procesos inflamatorios participan en diversas enfermedades degenerativas e infecciosas de la retina provocando la pérdida parcial o total de la viabilidad de distintos tipos celulares con el consecuente deterioro de la visión. En este sentido, se demostró que  el lipopolisacárido (LPS) bacteriano puede estimular directamente las células del epitelio pigmentario de la retina (RPE) desencadenando señales inflamatorias y apoptóticas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la presencia de las isoformas de la fosfolipasa D (PLD1 y PLD2) en las células del RPE y su participación en los eventos de señalización desencadenados en un modelo de inflamación inducido por LPS.   MÉTODOS: Se utilizó la línea celular humana de RPE ARPE-19. Como modelo de inflamación las células fueron tratadas con LPS (5, 10 y 100 μg/ml) por 24, 48 y 72 hs. La viabilidad celular se evaluó midiendo la reducción del reactivo MTT a cristales de formazán y se realizaron ensayos de western blot (WB) para determinar la presencia de las enzimas y la activación de la MAP quinasa ERK1/2 y de la proteína quinasa C (PKC) α/βII. RESULTADOS: Luego de 48 y 72 hs de tratamiento con 5, 10 y 100 μg/ml de LPS la viabilidad celular se redujo un 10, 15 y 21 % respectivamente. Los ensayos de WB demostraron la presencia de ambas isoformas de PLD (PLD1 y PLD2) en las células ARPE-19 y la activación de ERK1/2 luego de 24 hs de tratamiento con 5, 10 y 100 μg/ml de LPS. Asimismo, PKC α/βII se activó luego 24 hs de tratamiento con LPS 10 y 100 μg/ml. La preincubación de las células con el inhibidor de PLD2 (APV 0.5 μM) redujo significativamente la activación de ERK1/2 inducida por el tratamiento con LPS (10 μg/ml). Además, tanto APV  como el inhibidor de la vía  MEK/ ERK1/2  (U0126 10 μM) restituyeron la viabilidad celular a los niveles observados en la condición control luego de 48 hs de tratamiento con LPS. Por el contrario, el inhibidor de PLD1 (EVJ 0.15 µM) no fue capaz de contrarrestar los efectos producidos por el LPS. CONCLUSIONES: Los resultados demuestran la presencia de ambas isoformas de PLD  y la activación inducida por LPS de ERK1/2 y PKC α/βII en las células ARPE-19. Nuestros hallazgos sugieren que tanto  PLD2 como ERK1/2 mediarían el daño de las células del RPE en condiciones de inflamación.