Difusión de lisogenia en Lactobacillus delbrueckii. caracterización preliminar de dos fagos temperados aislados de una cepa comercial de Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis (Póster)

SUÁREZ, V.; ZAGO, M.; QUIBERONI, A.; BINETTI, A.; CARMINATI, D.; GIRAFFA, G.; REINHEIMER, J.

Buenos Aires (Argentina)

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; 2006

Asociación Argentina de Microbiología - DAMyC

Se estudió la presencia de profagos en 16 cepas de L. delbrueckii, 11 aisladas de fermentos artesanales utilizados en la elaboración de quesos italianos y 7 aisladas de fermentos comerciales ampliamente utilizados en nuestro país. Todas las cepas poseían el gen de la integrasa y la diversidad entre ellas se estudió por RAPD-PCR (primer M13). Se indujo con Mitomicina C (0.5 ug/ml) y los inducidos se testearon sobre todas las cepas para encontrar aquellas posibles hospedadoras. Esta búsqueda se realizó mediante el test en medio líquido, spot-test y test de la microplaca. Se procedió al aislamiento de los fagos temperados en el caso de que los fagos se pudieran propagar y, en caso contrario, a la determinación de la presencia de partículas "killer" (no propagables), usando células no proliferantes.                 En el 37%  (6 cepas) de las cepas se pudo encontrar al menos una cepa hospedadora. De los 6 inducidos, 3 provinieron de cepas comerciales y 3 de cepas salvajes. Solamente el inducido proveniente de la cepa comercial Cb1 (L.delbrueckii subsp. lactis) resultó capaz de propagar sobre dos cepas, L.l.204 y L.b.342. Estos fagos (Cb1/204 y Cb1/342) se caracterizaron analizando morfología (microscopía electrónica), perfiles de restricción de ADN, mecanismos de empaquetamiento y presencia, por PCR, de fragmentos conservados para fagos de L.delbrueckii de los genes que codifican la proteína mayoritaria de la cola y la lisina, espectro de hospedadores, influencia de la presencia de iones Ca2+ en la lisis en medio líquido y % de adsorción. Los 5 inducidos restantes no pudieron ser propagados, pero se demostró la posibilidad de la presencia de partículas fágicas defectuosas, incapaces de propagar más de 1 ciclo viral. La sensibilidad cruzada realizada entre los dos fagos y las dos cepas muestra una lisis tardía del Cb1/342 sobre la cepa L.l 204. Ambos fagos necesitan la presencia de iones Ca2+ para completar la lisis, pero el ensayo de adsorción con y sin iones Ca2+ reveló que estos no influyen en esta primera etapa del ciclo lítico. La tasa de adsorción (30 min) fue similar para ambos fagos (99%), sugiriendo la posibilidad de algún mecanismo intracelular de resistencia en la cepa L.l 204 que retardaría la lisis en medio líquido. Los perfiles de restricción mostraron diferencias cuando el ADN genómico de ambos fagos fue tratado con endonucleasas de restricción.                 Este estudio demuestra la existencia de lisogenia en L. delbrueckii y su consecuente peligrosidad en el uso de estas cepas en elaboraciones industriales. Particularmente, la cepa comercial Cb1, usada ampliamente en nuestro país, es fuente de partículas fágicas que podrían infectar a otras cepas de fermentos comerciales.