INVESTIGADORES
MORON Victor Gabriel
congresos y reuniones científicas
Título:
Agonistas de TLR7 tienen capacidad adyuvante sobre la activación de linfocitos T CD8+
Autor/es:
MARÍA INÉS CRESPO; MIGUEL RUFAIL; BELKYS A. MALETTO; MARÍA C. PISTORESI-PALENCIA; GABRIEL MORÓN
Lugar:
La Falda, Cordoba
Reunión:
Congreso; LVI Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
El ARN de simple hebra (ARNsh) activa las células dendríticas (DCs) murinas a través de TLR7. Previamente demostramos que BMDCs estimuladas con ligandos de TLR7 aumentan su capacidad de realizar presentación cruzada de antígenos (Ag) exógenos in vitro. Se usaron tres agonistas de TLR7: Poly U, Imiquimod y Gardiquimod. Para estudiar si éstos pueden estimular la presentación cruzada en DCs esplénicas se realizó un estudio de presentación in vitro utilizando el hibridoma de células T CD8+ B3Z, específico para OVA257-264. DCs purificadas de bazo de ratones C57BL/6 incubadas con ovalbúmina en forma de complejos inmunes en presencia de Gardiquimod produjo un aumento en la presentación de OVA (hasta 25 veces, p<0,05) con respecto a las DCs sin estímulo.Para evaluar el efecto de los ligandos de TLR7 en el desarrollo de una respuesta específica, se realizó un ensayo de inducción de citotoxicidad in vivo. Ratones C57BL/6 fueron inmunizados con perlas de látex unidas a OVA (perOVA) junto a Poly U estabilizado con DOTAP. Luego de 7 días, los animales fueron inyectados con células blanco marcadas con CFSE. Los animales que fueron inmunizados con Poly U presentaron (98,0±0,6)% de lisis específica (p<0,05). Estos resultados se correlacionan con la secreción de IFN-γ por esplenocitos reestimulados in vitro. Para analizar la participación de células T CD4+ en la inducción de respuesta citotóxica, se inmunizaron ratones en las mismas condiciones descriptas, depletados de estas células por inyecciones i.p. con anticuerpo antiCD4 (clon GK1.5). Como control se utilizaron ratones inyectados i.p. con IgG. Por citometría de flujo observamos, 0% de células CD3+ CD4+ en los animales depletados. Estos animales depletados presentaron una menor lisis específica que los animales controles (p<0,05). Cuando se reestimularon los esplenocitos in vitro no se observó secreción de IFN-γ en los animales depletados, confirmando la necesidad de linfocitos T CD4+ para la inducción de linfocitos T CD8+ citotóxicos (CTLs). Para evaluar si la inducción de CTLs podría ser resultado de la estimulación in vivo de DCs, se inmunizaron animales con DCs esplénicas estimuladas con Poly U/DOTAP + perOVA; 7 días post-inmunización se observó 62% de lisis específica, indicando la inducción de CTLs específicos.Estos resultados muestras que los ligandos de TLR7 utilizados tienen capacidad adyuvante sobre la activación de linfocitos T CD8+, mediante la estimulación de DCs y la cooperación de linfocitos T CD4+.
