El ARNsh aumenta en las celulas dendríticas la presentacion cruzada de antigenos

CRESPO, MAR¨ªA IN¨¦S; PISTORESI, MARÍA CRISTINA; MORÓN, GABRIEL.

MAR DEL PLATA

Congreso; LIV REUNION DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INMUNOLOGIA; 2006

SOCIEDAD ARGENTINA DE INMUNOLOGÍA

Recientemente se ha encontrado que el ARN, en una disposicion de simple hebra (ARNsh), como en el virus de la influenza, interactua con las celulas dendriticas (DCs) murinas a trav¨¦s de TLR7, activ¨¢ndolas. Se ignora si tal interacci¨®n estimula el procesamiento y presentacion de antigenos y en particular, la presentacion cruzada de antigenos (Ag) y la generacion de CTLs. En este trabajo se analizo si el ARNsh puede estimular la presentacion cruzada de antigenos exogenos. Se utilizo Poly U como modelo de ARNsh y se usaron DCs derivadas de medula osea (BMDCs) generadas en presencia de Flt3-L. Como antigeno exogeno se uso la proteina ovoalbumina (OVA) en su forma soluble y en complejos inmunes de OVA (IC-OVA). Se midio por citometria de flujo la variacion en la expresion de CD40, CD86 y MHC II por las BMDCs. Luego de incubar 12 horas con Poly U a 10 ug/ml, las celulas tratadas mostraron un aumento en la expresion de las moleculas estudiadas con respecto al nivel basal (∆MFI, media+/-SD, MHCII 6+/-2, CD40 20+/-7 y CD86 12+/-7). Por ELISA, se observo que las BMDCs estimuladas con Poly U secretaron IL-12 (mas de 1250 pg/ml). Para ver el efecto del Poly U sobre la presentacion cruzada de antigenos, se realizo un estudio de presentacion in vitro utilizando el hibridoma de celulas T CD8+ B3Z, especifico para OVA257-264. Poly U produjo un aumento en la presentacion de OVA (hasta un maximo de 7,7 veces) y de IC-OVA (hasta un maximo de 2,6 veces) con respecto a las BMDCs sin estimulo. Para estudiar si este aumento estaba relacionado con un aumento en la captura y endocitosis de antigenos por las BMDCs, se evaluo la captura de OVA marcada con FITC por citometria de flujo. No se observo un aumento en la captura por la estimulacion de las BMDCs con Poly U. Estos resultados preliminares muestran que el ARNsh activa y aumenta los niveles de presentacion de Ag mediada por MHC I y en consecuencia muestran un potencial efecto adyuvante sobre la generacion de respuesta citotoxica.