Eudragit E100-Ofloxacino: cambios en el potencial e integridad de membrana inducidos por el polimero catiónico incrementan la acción del antimicrobiano con target intracelular frente a Pseudomonas aeruginosa resistentes a Fluoroquinolonas.

ROMERO, VERÓNICA L; BOCCO, JOSÉ LUIS; MANZO, RUBEN H.; ALOVERO, FABIANA L.

Mar del Plata

Congreso; 42° Reunión Anual de Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE),; 2010

SOCIEDAD ARGENTINA DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL

La impermeabilidad de la membrana externa de Pseudomonas contribuye a su resistencia intrínseca a los antimicrobianos. Eudragit E100 (Eu) es un polímero catiónico que interactúa con el grupo carboxílico de ofloxacino (OFLO) generando dispersiones claras (EuCl-OFLO) de pH 6,4 y potencial electrocinético (+). Resultados previos muestran que Eu potencia la acción bactericida de OFLO frente a Pseudomonas aeruginosa resistentes. Por microscopía electrónica se observaron alteraciones en la superficie bacteriana y estructuras vesiculares sobre las mismas. Se estudia el mecanismo por el cual Eu incrementa la eficacia de OFLO usando citometría de flujo a fin de evaluar cambios en potencial de membrana conducentes a pérdida de integridad de las envolturas bacterianas. Los sistemas EuCl-OFLO fueron preparados en nuestro laboratorio. Dos aislamientos clínicos de P.aeruginosa fueron tratados con EuCl-OFLO, OFLO o EuCl. Se estudió efecto de tiempo de contacto y concentración. Alícuotas teñidas con DIBAC (sonda fluorescente) se evaluaron por citometría de flujo. La sonda sólo entra a células con depleción en el potencial de membrana e interactúa con componentes intracelulares lipídicos. Las células expuestas a EuCl-OFLO exhiben alta intensidad de fluorescencia, independientemente del tiempo de contacto. Por su parte la población expuesta a OFLO solo difiere del control en concentraciones supra-CIM y luego de 24 hs, con desplazamiento a zonas de mayor fluorescencia, sin alcanzar los niveles de Eu-OFLO. Esto podría atribuirse a una respuesta secundaria a la acción de OFLO manifestada en largos tiempos de incubación. Similar comportamiento se observó al analizar la granularidad generada por los tratamientos comparados. Eu interactúa con la superficie aniónica celular y produce pérdida en potencial de membrana y alteraciones en la integridad de membrana, aunque carece de acción bactericida directa, actuando como permeabilizante para Pseudomonas e incrementando la acción de OFLO.