Perturbaci¨®n de la din¨¢mica conformacional del AChR causada por la presencia de esteroides y ¨¢cidos grasos.

FERN¨¢NDEZ NIEVAS, G.A.; BARRANTES, F. J.; ANTOLLINI, S. S.

La Plata, Argentina

Congreso; XXXVII Reuni¨®n anual de la sociedad argentina de biof¨ªsica; 2008

Sociedad Argentina de Biof¨ªsica

Perturbaci¨®n de la din¨¢mica conformacional del AChR causada por la presencia de esteroides y ¨¢cidos grasos. Fern¨¢ndez Nievas, Gaspar A., Barrantes Francisco J., & Antollini Silvia S. Instituto de Investigaciones Bioqu¨ªmicas de Bah¨ªa Blanca & C¨¢tedra UNESCO de Biof¨ªsica y Neurobiolog¨ªa Molecular, CC. 857, B8000FWB, Argentina. Esteroides y ¨¢cidos grasos son inhibidores no competitivos del receptor de acetilcolina nicot¨ªnico (AChR). Su sitio de acci¨®n es la interfase l¨ªpido-AChR, sin embargo a¨²n no ha podido dilucidarse mediante qu¨¦ mecanismo ocasionar¨ªan la inhibici¨®n del AChR. En el presente trabajo, utilizamos la sonda fluorescente cristal violeta (CrV) para el estudio del efecto causado por estas mol¨¦culas sobre el equilibrio conformacional del AChR. Para tal fin, membranas ricas en AChR de T. californica previamente incubadas con esteroides o  ¨¢cidos grasos libres, en ausencia o presencia del agonista carbamilcolina, fueron tituladas con CrV. CrV posee una mayor afinidad por el AChR en estado desensibilizado (D) respecto al estado de reposo (R), hecho que se evidencia por un incremento en su emisi¨®n de fluorescencia, y que permite calcular la constante de disociaci¨®n del CrV del AChR para ambos estados conformacionales. Concentraciones crecientes de distintos ¨¢cidos grasos y  esteroides produjeron un incremento del KD de CrV indicando un desplazamiento del equilibrio conformacional del AChR hacia el estado D. En presencia de agonista, s¨®lo los ¨¢cidos grasos cis-insaturados, los ¨²nicos capaces de alterar la polaridad de la membrana, produjeron un incremento del KD. La magnitud de este incremento depende de la posici¨®n de la doble ligadura en la cadena hidrocarbonada, en el caso de ¨¢cidos grasos cis-monoinsaturados. Resultados similares fueron observados cuando se alter¨® la polaridad/orden de la membrana mediante estrategias diferentes, tales como tratamiento con fosfolipasa A2 o incremento de temperatura (aumento o disminuci¨®n en la polaridad de la membrana, respectivamente). Estudios de extinci¨®n de la fluorescencia de la sonda pireno unida covalentemente al segmento ¦ÃM4 del AChR reconstituido en membranas modelo, usando ¨¢cidos grasos spin-marcados, evidenciaron la presencia de cambios conformacionales inducidos por esteroides y ¨¢cidos grasos cis-insaturados, y no por la presencia de ¨¢cidos grasos trans-insaturados o saturados. Los resultados obtenidos indican que el contacto directo de estas mol¨¦culas con los segmentos transmembrana del AChR lo apartar¨ªa de su estado R, mientras que la polaridad de membrana modular¨ªa el equilibrio de activaci¨®n/desensibilizaci¨®n por un mecanismo independiente.