Estudios a nivel molecular de la interacción entre el receptor de acetilcolina nicotínico y compuestos altamente hidrofóbicos en membranas de T. californica

FERNÁNDEZ NIEVAS, G.A.; BARRANTES, F.J.; ANTOLLINI, S.S.

Bahía Blanca

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca

El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es un canal iónico que pertenece a la superfamilia de receptores activados por ligando (“LGIC”). Se conoce una gran variedad de moléculas que actúan como inhibidores del AChR de un modo no-competitivo. Un grupo de ellas, moléculas altamente hidrofóbicas, ejercerían su acción mediante su localización en la membrana. Con el objeto de caracterizar a nivel molecular la interacción entre estos compuestos hidrofóbicos y el AChR se estudió la posible localización de sitios para esteroides en el microdominio del AChR en membranas de T. californica mediante estudios de transferencia de energía resonante entre la fluorescencia intrínseca del AChR, como donante, y la sonda Laurdan (6-dodecanoil-2-(dimetilamino)nafataleno) como aceptor. Utilizamos la disminución de la eficiencia de dicho proceso (E), ocasionada por la presencia de inhibidores no competitivos altamente hidrofóbicos, para identificar potenciales sitios de interacción. Se estudió el efecto del agregado individual de distintos esteroides (cortisona, hidrocortisona y 11-hidroxi-progesterona) y del ácido araquidónico (20:4) y de la competencia entre ellos. Todos los compuestos ocasionaron disminuciones semejantes de E, mientras que el agregado de una segunda molécula no ocasionó mayores variaciones en la disminución de E. Estudios semejantes en membranas tratadas con proteinasa K, enzima que no penetra la membrana, a distintos tiempos (muestras con 100-80%, 80-60 % y 60-40% de la cantidad de proteína original) presentaron una respuesta a los esteroides y ácidos grasos semejante a la obtenida en la membrana intacta. Este tipo de estudios realizado con el AChR desensibilizado (en presencia de altas concentraciones de carbamilcolina) mostraron curvas de desplazamiento diferentes a las anteriores. Estos resultados nos permiten postular la presencia de sitios para esteroides, comunes a los previamente caracterizados para los ácidos grasos libres, que se localizarían en la interfase lípido-dominio transmembrana de la proteína, los cuales serían dependientes del estado conformacional del AChR.