El 17 beta-estradiol a traves del REalfa estimula la translocacion del REalfa endogeno intracelular a la membrana plasmatica y activa la via PKC/ERK1/2 en celulas adenohipofisarias normales

GUTIERREZ, S.; SOSA, L.V.; PETITI, J.P.; MUKDSI, J.H.; CAMBIASSO, M.J.; DE PAUL, A.L.; TORRES, A.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2011

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

En continuacion con investigaciones previas en las que demostramos que la actividad secretoria y proliferativa de celulas adenohipofisarias es regulada por E2 con la participacion RE de membrana, nos propusimos analizar la modulacion de los diferentes pooles de RE por accion del 17¦Â-estradiol (E2) en adenohipofisis. Cultivos primarios adenohipofisarios de rata hembra se trataron con 10 nM de E2 y con un agonista del RE¦Á (PPT) por 0, 5, 15 y 30min. Se inmunomarco el RE¦Á mediante microscopia electronica (ME, tecnica de celulas intactas) y confocal (MC), citometria de flujo (FACS, en celulas sin permeabilizar) y por western blot (WB, por biotinilacion de proteinas de superficie). Ademas, se detecto la activacion de de PKC (por MC) y de ERK1/2 (por WB). Analisis estadistico ANOVA-Fisher. Nuestros resultados muestran la presencia del RE¦Á en la membrana plasmatica de lactotropas, gonadotropas y somatotropas por inmunomarcacion con ME. Mediante biotinilacion de proteinas de superficie se detecto el full-length del RE¦Á (¡Ö6 KDa) en la fraccion del pellet (proteinas de membrana) siendo esta expresion incrementada por E2 y PPT, en el sobrenadante (proteinas intracelulares) se observo ademas una isoforma de ¡Ö5 KDa. Mediante MC el RE¦Á fue identificado en nucleo y citoplasma y luego de la estimulacion con E2 o PPT fue detectado ademas en la membrana plasmatica, colocalizando con el marcador de membrana Concanavalin A. El 7.7} 0.6 de lactotropas expresaron RE¦Á en la superficie mediante FACS, incrementando 23.0 }2.1 % la intensidad de fluorescencia luego del tratamiento con E2. A partir de los 5 min de estimulo con E2 o PPT se detecto activacion de la via PKC/ERK1/2. Nuestros resultados demuestran que el RE¦Á esta localizado en la superficie de celulas adenohipofisarias normales sugiriendo que el E2 a traves del RE¦Á estimula la translocacion del RE¦Á endogeno intracelular a la membrana plasmatica.