Estandarización de la técnica de cish para determinación de la 1pLOH en ologodendrogliomas y estudio de la expresión de Bcat, Hsp27 y Hsp70.

CASTRO G. N.; FANELLI M.A.; CIOCCA D.R.

TANDIL, BUENOS AIRES

Congreso; XXXVII Congreso Argentino de Genética; 2008

Estandarización de la técnica de CISH para determinación de la 1pLOH en oligodendrogliomas y estudio de la expresión de Bcat, Hsp27 y Hsp70.              Castro GN, MA Fanelli, Dr. Ciocca. IMBECU-CCT-CONICET gcastro@lab.cricyt.edu.ar Los gliomas son las neoplasias primarias más comunes del sistema nervioso central. Entre sus subtipos los oligodendrogliomas se destacan por su comportamiento clínico diferencial. Aberraciones genéticas como la pérdida de heterocigosidad del 1p (1pLOH) presente en un 50-90% de los casos, ha sido relacionada con la histología típica de estos tumores, quimiosensibilidad y buen pronóstico. El objetivo de este trabajo fue identificar esta deleción para contribuir con el diagnóstico y decisiones terapéuticas así como evaluar posibles relaciones entre la 1pLOH y la expresión de Bcat, Hsp27 y Hsp70. Para ello se estandarizó la técnica de CISH que utiliza sondas marcadas con biotina y digoxigenina en tumores incluidos en parafina. Se trabajó primero con muestras de cuello uterino para la identificación de distintos subtipos de HPV, y con muestras de cáncer de mama para determinar la amplificación del gen Her2/neu, para luego ajustar el CISH en oligodendrogliomas. Los protocolos seleccionados se destacan por dos pasos críticos, un pre-tratamiento en buffer citrato y una digestión con pepsina que favorecen el acceso de la sonda al tejido, los mismos permitieron obtener buena calidad de señal, especificidad de ubicación y bajo background. De 13 gliomas analizados, 9 presentaron 1pLOH positiva y 6 de ellos fueron reclasificados a oligodendrogliomas. Si bien se logró una detección adecuada por inmunohistoquímica de las tres proteínas, debido al reducido numero de muestras, no se consiguió establecer relaciones estadísticas significativas con la 1pLOH (se observaron tendencias a estar correlacionadas).