Q-Y-DEG HRM: cuantificación ADN humano, detección ADN masculino y determinación de integridad de material genético en simultáneo mediante q-PCR seguido Desnaturalización Térmica de Alta Resolución (DTAR)

GINART SANTIAGO; CAPUTO, MARIELA; CORACH, DANIEL; ANDREA SALA

S.C. de Bariloche

Jornada; XV Jornadas de Genética Forense de la Sociedad Argentina de Genética Forense; 2017

SAGF (Sociedad Argentina de Genética Forense)

OBJETIVOS: Desarrollar un sistema de PCR en tiempo real de bajo costo económico que posibilite, en forma simultánea, cuantificar ADN humano, detectar ADN masculino y determinar la integridad/calidad del material genético bajo estudio para ser incorporado al laboratorio forense.MÉTODOS: Consiste en una reacción multiplex que amplifica tres segmentos genéticos diferentes en presencia de un agente intercalar (Syto9): 1- fragmento de cromosoma Y (84 pb), 2-fragmento largo (244 pb), 3-fragmento corto (152 pb). La fluorescencia total es medida en tiempo real y permite la cuantificación de ADN humano, mientras que DTAR posibilita la detección de ADN masculino y la determinación de la integridad del material genético.RESULTADOS: El sistema triplex genera curvas de calibración con elevada precisión y reproducibilidad dentro de un rango 3.2 pg/ul ? 50 ng/ul, posibilitando la cuantificación de muestras incógnita. Detecta la presencia de ADN masculino incluso en baja concentración por visualización de un pico de melting característico a 72 °C. El comportamiento diferencial ante DTAR de los fragmentos largo y corto permite inferir el grado de integridad del ADN.CONCLUSIONES: Se desarrolló un sistema rápido y sensible que es aplicable a cualquier campo donde la medición cuanti-cualitativa de ADN humano es necesaria.