Fosfatidilinositol 3-quinasa está involucrada en la alteración secretora biliar ocasionada por estradiol 17ß-glucurónido en la rata.

BOAGLIO, AC; ZUCCHETTI, AE; SANCHEZ POZZI, EJ; PELLEGRINO, JOSÉ M; MOTTINO, ALDO D; CROCENZI, FERNANDO A; ROMA, MARCELO G

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Hepatología 2009; 2009

Asociación Argentina para el estudio de las enfermedades del Hígado

Introducción y objetivos: El estradiol 17β-glucurónido (E17G) es un metabolito colestásicoendógeno cuyos niveles aumentan varios órdenes de magnitud durante el embarazo. Demostramosque dicho metabolito induce colestasis por internalización endocítica de transportadorescanaliculares cruciales para la secreción biliar, tales como el transportador de salesbiliares Bsep (Am. J. Physiol 285: G449, 2003) y el transportador de GSH/bilirrubinaMrp2 (Hepatology 35:1409,2002); esto justificaría la asociación causal de E17G con la colestasisdel embarazo. La activación de la vía de señalización mediada por la fosfatidilinositol3 quinasa (PI3K) ha sido involucrada en la colestasis por taurolitocolato (JBC 278:17810, 2003). Puesto que existen patomecanismos comunes entre ambos tipos de colestasis,indagamos aquí si PI3K está involucrada también en los efectos colestásicos de E17G.Resultados: E17G (400 μM) promovió la fosforilación del efector final de PI3K Akt encultivo primario de hepatocitos a partir de los 20 min, indicando activación de PI3K porE17G. Se analizó la capacidad de los inhibidores de PI3K wortmanina (WM; 100 nM) yLY294002 (50 μM), así como de un inhibidor de Akt (Calbiochem® #124005; 20 μM),para prevenir la alteración secretora ocasionada por E17G en duplas aisladas de hepatocitosde rata (DAHRs), un modelo hepatocelular in vitro con polaridad secretora. Todos losinhibidores previnieron parcialmente la disminución inducida por E17G en la capacidadde las DAHRs para secretar a la vacuola canalicular el sustrato fluorescente de Bsep CLF yel sustrato fluorescente de Mrp2 GS-MF (p < 0.05, - ANOVA/Newman-Keuls). La inmunodetecciónde Bsep y Mrp2 en DAHRs seguida de microcopia confocal y análisis de imagenreveló que la internalización endocítica de transportadores inducida por E17G fue significativamenteprevenida por WM (p < 0.05, - ANOVA/Newman-Keuls). Gö6976 (2μM), un inhibidor de isoformas ‘clásicas’ de PKC (cPKC), mostró aditividad con WM, sugiriendomediación complementaria de las vías PI3K y cPKC en el efecto colestásico deE17G. Para evaluar este fenómeno en un modelo más fisiológico, confirmamos los efectosanticolestásicos de WM en hígados aislados y prefundidos de rata. La inyección intraportalde E17G (2 μmol) indujo una disminución aguda del flujo biliar dentro de los 10 min,no recuperándose durante el resto del período de perfusión (60 min). WM (200 nM) noprevino este decaimiento inicial, pero aceleró significativamente la recuperación del flujobiliar a la normalidad. Se observó un comportamiento similar con las excreciones biliaresdel substrato de Bsep [3H]taurocolato y del substrato de Mrp2 GSH.Conclusiones: La vía de señalización PI3K/Akt modula la falla secretora biliar inducida porE17G, promoviendo la internalización sostenida de transportadores canaliculares claves parala secreción biliar. PI3K/Akt puede ser, por lo tanto, un blanco terapéutico en el fenómenocolestásico asociado a estrógenos.