Protección por glucagon de la colestasis por estradiol 17ß-glucurónido en la rata es independiente de microtubules y dependiente de PKA.

ZUCCHETTI, AE; CROCENZI, FERNANDO A; SANCHEZ POZZI, EJ

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentina de Hepatología 2009; 2009

Asociación Argentina para el estudio de las enfermedades del hígado

AMPc previene la colestasis por estradiol-17ß-glucurónido (E17G) por un mecanismo dependientede la integridad de los microtúbulos e independiente de PKA. La hormona glucagon (G)eleva los niveles hepáticos de AMPc y tiene efectos protectores sobre la colestasis por E17G. Elobjetivo de este trabajo fue comparar los efectos protectores de G y AMPc sobre la colestasispor E17G. Se utilizó un modelo in vitro de duplas aisladas de hepatocitos (DAHR). Estas seobtuvieron por perfusión con colagenasa seguida de elutriación. Luego de 5 hs de cultivo,DAHR se incubaron con G (0,4mg/l) o dibutiril-AMPc (DBAMPc, análogo difusible deAMPc, 10μM) por 15 min, seguido de incubación con E17G (50μM) o solvente por 20 miny finalmente expuestas a colil lisil fluoresceína (CLF, sustrato de Bsep, 2μM) o clorometil fluoresceínadiacetato (CMFDA, cuyo metabolito conjugado con glutation, GMF, es sustrato deMrp2, 1 μM) por 15 min adicionales. Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentajede DAHR que acumularon CLF (acCLF) o GMF (acGMF). Otras preparaciones deDAHR fueron preincubadas antes de exponerlas a G o AMPc con colchicina (COL, inhibidorde microtúbulos, 1μM) o los inhibidores de PKA, H89 (0,1μM) o KT5720 (50 nM). Resultados:la preincubación de DAHR con COL previno el efecto de DBAMPc sobre la colestasispor E17G pero no afectó el efecto preventivo de G (acCLF (%) Control: 100±0, COL: 99±3;G: 102±5; DBAMPc: 97±3; E17G: 51±3a; E17G/COL: 54±13a; E17G/G: 86±12b; E17G-/COL/G: 82±9b; E17G/DBAMPc: 94±18b; E17G/COL/DBAMPc: 58±9a; acGMF (%)Control: 100±0, COL: 99±1; G: 101±2; DBAMPc: 101±1; E17G: 56±7a; E17G/COL:60±7a; E17G/G: 88±5b; E17G/COL/G: 94±8b; E17G/DBAMPc: 95±10b; E17G/COL/DBAMPc:65±4a; a diferente de Control y b diferente de E17G y E17G/COL, n=4, p<0.05); lainhibición de PKA previno el efecto de G sobre la colestasis por E17G sin afectar el efecto deDBAMPc (acCLF (%) H89: 98±2; KT5720: 100±2, E17G/H89: 56±5a; E17G/KT5720:57±7a; E17G/G/H89: 59±10a; E17G/G/KT5720: 65±5a, E17G/DBAMPc/H89: 95±19b;E17G/DBAMPc/KT5720: 94±17b; acGMF (%) H89: 97±5; KT5720: 99±4; E17G/H89:59±3a; E17G/KT5720: 57±5a; E17G/G/H89: 66±3a; E17G/G/KT5720: 67±11a, E17G/DBAMPc/H89: 94±8b; E17G/DBAMPc/KT5720: 93±5b, a diferente de Control y E17G/G yb diferente de E17G, n=4, p<0.05). Conclusión: Glucagon protege de la disminución en la actividadde los transportadores Bsep y Mrp2 inducida por E17G por un mecanismo independientede microtúbulos y dependiente de la activación de PKA. Este mecanismo protectivo difieredel que manifiesta DBAMPc. Esto podría indicar que existen dos vías por las que AMPcprotege de la colestasis: una vía dependiente de la síntesis del mensajero inducida por la hormonaque lo hace a través de PKA sin la necesidad de microtúbulos y la otra, en la que el AMPcaumenta intracelularmente por difusión desde el exterior, requiere la integridad de microtúbulosy lo hace sin activar PKA.