PAPEL DE LAS PROTEÍNAS QUINASAS ACTIVADAS POR MITÓGENO EN LA ALTERACIÓN DE LA FUNCIÓN SECRETORA CANALICULAR INDUCIDA TERT-BUTILHIDROPERÓXIDO EN DUPLAS DE HEPATOCITOS DE RATA

TOLEDO, FLAVIA D; BASIGLIO, CECILIA L; BOAGLIO, AC; SANCHEZ POZZI, EJ; ROMA, MARCELO G

Mar del Plata

Congreso; Congreso SAIC; 2010

SAIC

Estudios previos de nuestro grupo demostraron que el agentepro-oxidante modelo tBOOH induce alteraciones en la funciónsecretora hepatocanalicular de DAHRs vía activación de isoformasde proteína quinasa C dependientes de Ca2+. Estas quinasasmedian la desorganización del citoesqueleto de actina con laconsecuente disrupción de las uniones estrechas intercelularesy la internalización endocítica de transportadores canalicularesresponsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2. Dado que lasMAPKs podrían actuar como efectores cascada abajo de cPKC,en este estudio indagamos la participación de vías de señalizaciónde las isoformas de MAPKs de tipo ERK, JNK y p38MAPK en losefectos deletéreos funcionales del tBOOH en DAHRs. tBOOH(125 μM) disminuyó la capacidad de las DAHRs para secretarapicalmente el sustrato de Bsep colil-lisil-fluoresceína (-50±4%,p<0.005). Los inhibidores selectivos de MAPKs de tipo ERK 1/2(PD098059, 50 mM), de tipo JNK (SP600125, 10 μM) y de tipop38MAPK (SB203580, 1 μM) previnieron parcialmente esta alteración(PD098059: +28±5; SP600125: +34±5; SB203580: +29±4; n=6,p<0.05). Con el sustrato de Mrp2 glutation-metil-fluoresceínalos resultados fueron similares: tBOOH (125 μM) disminuyó lasecreción apical del sustrato en DAHRs (-52±4%, p<0.005) y losinhibidores selectivos de MAPKs previnieron parcialmente estaalteración (PD098059: +28±3; SP600125: +31±2; SB203580:+31±3, n=5, p<0.05). Técnicas de inmunomarcado seguido de microscopíaconfocal revelaron que tBOOH (125 μM) indujo marcadainternalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con losdiferentes inhibidores de MAPKs previnieron parcial pero significativamenteestas alteraciones. Concluimos que las MAPKs de tipop38MAPK, ERK y JNK participan parcialmente en las alteracionesfuncionales inducidas por tBOOH sobre la capacidad de DAHRspara secretar sales biliares al canalículo biliar promoviendo lainternalización endocítica de transportadores canaliculares.