EN LA COLESTASIS POR ESTRADIOL-17â-DGLUCURÓNIDO (E17G) EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA LA PARTICIPACIÓN DEL RECEPTOR DE ESTRÓGENO ES POSTERIOR A LA ACTIVACIÓN DE PKC alfa

BAROSSO, IR; ZUCCHETTI, AE; TABORDA, DR; CROCENZI, FA; SANCHEZ POZZI EJ

Mar del Plata

Congreso; Congreso SAIC; 2010

SAIC

La activación del RE es necesaria para ciertos efectos delestradiol tales como la activación de quinasas de señalización:PKC y PI3K. Previamente demostramos que ambas quinasasparticipan en la colestasis por E17G, su derivado glucuronizado,por lo que se evaluó el rol del RE en esta patología. La activacióndel RE se manifiesta por su fosforilación en ser118 y puede serbloqueada por ICI182,780 (ICI). Métodos: Estudios funcionales:DAHR fueron tratadas con dosis crecientes de E17G (25-800 μM)en presencia de ICI (1μM) y luego expuestas a clorometilfluoresceínadiacetato un compuesto lipofílico captado por difusión pasivay convertido en glutation metilfluoresceína (GSMF), sustrato deMrp2. Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentajede DAHR que acumularon GSMF en la vacuola canalicular.Se evaluó además el efecto conjunto de ICI y Gö6976 (1μM),inhibidor de sobre el efecto de E17G (100μM) en la acumulaciónvacuolar de GSMF, PKC. Resultados (n=3): Las curvas dosisrespuestasmostraron que ICI aumentó CE50 de E17G (86±4μMvs 317±24μM, p<0.05). ICI y Gö6976 protegieron sin sumarsus efectos (E17G:66±6%, E17G+ICI:87±4%, E17G+Gö:89±2%,E17G+ICI+Gö:84±7%, p<0.05) sugiriendo que comparten unamisma vía de señalización. Para establecer un orden de activaciónse evaluó la activación del RE inducida por E17G (100μM)en presencia de Gö6976 (estimada por Western blot [WB] del REfosforilado relativizado al RE total) y la activación de PKC porE17G (100μM) en presencia de ICI (evaluada por translocaciónde PKC a membrana estimada por WB). Se observó que ICI noprevino la activación de PKC inducida por E17G, en cambio,Gö6976 previno la activación de RE inducida por E17G (%Control=E17G:176±3%, E17G+Gö:88±12%, p<0.05, n=3). Conclusiones:El bloqueo de la activación del RE previene la alteración funcionaldel transportador Mrp2 producida por E17G. El RE compartiría lavía de señalización con PKC, siendo la activación de la quinasaprevia a la activación de RE.