ROL DE EPAC (EXCHANGE PROTEIN ACTIVATED BY CAMP) EN LA PROTECCIÓN POR SALBUTAMOL (AGONISTA ADRENÉRGICO ß2) DE LA COLESTASIS POR ESTRADIOL 17-ß GLUCURONIDO EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA

ZUCCHETTI, AE; BAROSSO, IR; OCHOA, J ELENA; CROCENZI, FERNANDO A; SANCHEZ POZZI, EJ

Mar del Plata

Congreso; Congreso SAIC; 2010

SAIC

Vimos previamente que S modula el AMPc hepático y asípreviene de la colestasis por E de forma independiente de PKAy dependiente de microtúbulos (mt). Una vía de acción de AMPcindependiente de PKA es vía Epac. En DAHR, se evaluó laprevención por Epac de la alteración funcional por E en lostransportadores canaliculares Bsep y Mrp2. También se comparósu acción preventiva con S y con glucagon (G, dependiente dePKA, independiente de mt). Se obtuvieron DAHR de ratas Wistarhembra adultas por perfusión con colagenasa y elutriación. Luegode 5h de cultivo se trataron con un agonista Epac (8-CPT-AMPc,50 μM, 15 min) y se co-trataron con S 10μM o G 1μM. Un grupode preparaciones se pretrató 30 min con el inhibidor de mt colchicina(Col 1μM). Luego se incubó cada grupo experimental 20min con E (50μM) o solvente. Finalmente, se expusieron 15 mina colil lisil fluoresceína (CLF 2μM, sustrato de Bsep) o clorometilfluoresceína diacetato (CMFDA 2,5 μM, cuyo metabolito, GMF,es sustrato de Mrp2). Por microscopía de fluorescencia se determinóel porcentaje de DAHR que acumularon CLF (cvaCLF)o GMF (cvaGMF). Resultados (media±SD): E redujo la cvaCLFy cvaGMF. Epac previno la reducción causada por E. Col inhibióla acción de Epac. Al contrario de G, S en conjunto con Epac notuvo efectos aditivos (p<0.05, n=3)%CVA Control E E-Epac E-S E-Epac-S E-G E-G-Epac E-Col E-Col-EpacCLF 100+0 49+6a 78+9b 77+6b 74+9b 74+3b 92+7c 63+1a 64+3aGMF 100+0 61+2a 94+3b 80+4b 88+5b 81+4b 106+2c 65+5a 72+3aa difiere significativamente de control.b difiere significativamente de control y de E.c difiere significativamente de E, E-G, E-Epac.Conclusión: al igual que S, Epac protege parcialmente de laalteración funcional por E por un mecanismo dependiente de mt.A su vez, sus acciones conjuntas no muestran un efecto aditivo.Esto sugeriría que S protege activando la vía Epac.