MODULACIÓN POR SALBUTAMOL (S) DE LA COLESTASIS INDUCIDA POR ESTRADIOL-17ß- GLUCURÓNIDO (E) EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHR).

ZUCCHETTI, AE; BAROSSO, IR; OCHOA, JE; CROCENZI, FA; SÁNCHEZ POZZI, EJ

Mar del Plata

Congreso; Reunion Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

SAIC

AMPc previene de la colestasis por E. Los niveles hepáticos de AMPc son regulados, en parte, por agonistas adrenérgicos los cuales actúan mediante el receptor b2. En DAHR se evaluó la acción del agonista b2, S sobre la alteración por E de la función de los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2. Se corroboró la participación del receptor b2 con el antagonista b2 adrenérgico butoxamina (B). Finalmente se estudió la dependencia de la protección de PKA (inhibidores KT5720 y H89) y de microtúbulos(inhibidor colchicina, C). Se obtuvieron DAHR por perfusión con colagenasa seguida de elutriación. Luego de 5 hs de cultivo se realizaron los siguientes experimentos: 1) Incubación 15min con S (10μM), seguido de incubación 20 min con E (50μM) o solvente y finalmente expuestas 15min a colil lisil fluoresceína (CLF, 2μM, sustrato de Bsep) y clorometil fluoresceína diacetato (CMFDA, 2,5μM, cuyo metabolito, GMF, es sustrato de Mrp2). Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF (cvaCLF) o GMF (cvaGMF). 2) Preincubación 15min con B (5μM) y luego se siguió igual que en 1). 3) Pre-incubación 30min con C (1μM) y luego se siguió igual que en 1). 4) Pre-incubación 15min con KT5720 (50nM) ó H89 (200nM) y luego se siguió igual que en 1). Resultados (media±ES): E redujo la cvaCLF y cvaGMF. S previno parcialmente, recuperando significativamente la reducción causada por E. B y C inhibieron la acción de S. En cambio KT5720 y H89 no inhibieron la acción de S. Cva Control E E-S E-S-B E-S-KT5720 E-S-H89 E-C E-S-C CLF 100±0 52±2a 77±3b 57±6a 74±1b 71±1b 48±2a 48±3a CMFDA 100±0 64±2a 84±5b 64±3a 76±1b 78±3b 56±2a 55±3a adiferente significativamente de control (p