PARTICIPACIÓN DE LA VÍA GPR30/ADENILATO CICLASA (AC)/PKA EN LA COLESTASIS INDUCIDA POR ESTRADIOL 17ß-D-GLUCURONIDO (E17G) EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA

ZUCCHETTI, AE; BAROSSO, IR; DAVIO, C; CROCENZI, FA; SÁNCHEZ POZZI, EJ

Mar del Plata

Congreso; Congreso SAIC 2011; 2011

SAIC

Previamente observamos que algunas vías de señalización activadas por estradiol en diferentes tejidos son activadas también por E17G en hígado, conduciendo a alteraciones de localización y función de los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2. Además, se demostró que estradiol a través del receptor GPR30, aumenta AMPc en distintas células, incluso hepatocitos. Por ello evaluamos el rol de la vía GPR30/AC/PKA en las alteraciones colestásicas por E17G en DAHR. Se obtuvieron DAHR de ratas Wistar hembras adultas por perfusión con colagenasa y elutriación. Luego de 5h de cultivo se realizaron las siguientes incubaciones: 1) 10 min con E17G (50 μM), DMSO (C), forscolina (FK 2,5 μM, control positivo) en presencia de IBMX (0,8 mM, inhibe fosfodiesterasa). Se midió AMPc por competición de [3H]AMPc por PKA inmovilizada en carbono-dextran. 2) 15 min con los inhibidores G15 10nM (GPR30), SQ22536 10µM y MDL12330 20µM (AC) KT5720 0,25μM, H89 1μM y Rp-cAMPS 10μM (PKA), previo a 20 min con E17G. Finalmente 15 min de exposición a colil-lisilfluoresceína (CLF 2µM, sustrato de Bsep) o clorometil fluoresceína diacetato (2,5µM, precursor de GMF, sustrato de Mrp2). Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF (%cvaCLF) o GMF (%cvaGMF). Resultados (%C, media±ES): 1) E17G aumentó los niveles de AMPc intrahepatocitarios (C=100±0, E17G=226±29a, FK=6867±1976a). C=0,8 pmol/105 DAHR. 2) E17G redujo el %cvaCLF y %cvaGMF. La inhibición de la vía GPR30/AC/PKA previno la reducción causada por E17G [C (100±0) E17G (55±4a, 57±3a); E17G+G15 (92±4b, 91±5b); E17G+SQ22536 (98±6b, 92±2b); E17G+MDL12330 (92±5b, 83±3c); E17G+KT5720 (87±2c, 88±6c), E17G+H89 (79±3c, 87±3c), E17G+Rp-cAMPS (83±3c, 82±2c) %cvaCLF y GMF, respectivamente]. ap<0,05 vs C, bp<0,05 vs E17G, cp<0,05 vs C y E17G (n=3). E17G aumenta AMPc intrahepatocitario posiblemente vía GPR30/AC. Este segundo mensajero, vía PKA, sería clave en las alteraciones del transporte canalicular inducidas por E17G.