Modulación por proteína quinasas activadas por mitógeno (MAPKs) del estrés oxidativo (EO) y la alteración de la función secretora hepatocanalicular inducida por tert-butilhidroperóxido (tBOOH).

TOLEDO, FD; BASIGLIO, CL; BOAGLIO, AC; BAROSSO, IR; ZUCCHETTI, AE; SÁNCHEZ POZZI, EJ; ROMA, MG

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2012

SAFIS

En estudios previos en duplas aisladas de hepatocitos de rata, demostramosque el tert-butilhidroperóxido (tBOOH), un agente que provocaEO vía formación de poros de transición de permeabilidad mitocondrial,induce alteraciones en la función secretora hepatocanalicular vía internalizaciónendocítica de transportadores canaliculares, y que las MAPKsdel tipo ERK 1/2, JNK 1/2 y p38MAPK están involucradas en dichoefecto. En este trabajo, indagamos en el mecanismo de injuria oxidativamediado por MAPKs, estudiando la participación de las misma en lageneración de EO inducido por tBOOH. La mediación de MAPKs en laalteración secretora hepatobiliar fue además confirmada en el modelode hígado aislado y perfundido de rata (HAPR), el cual conserva la integridadfisiológica epitelial. Para estudiar la influencia de las MAPKs en lageneración de EO inducido por tBOOH, se trataron hepatocitos de rataen cultivo primario con tBOOH (100 μM) durante 15 min, preincubados(o no) durante 15 min con inhibidores específicos de MAPKs del tipo ERK1/2 (PD098059 –PD–, 5mM), JNK 1/2 (SP600125 –SP–, 1μM) o p38MAPK(SB203580 –SB–, 1μM). El EO se evaluó midiendo la a)lipoperoxidaciónde membranas (LPO), mediante la formación de sustancias reactivas alácido tiobarbitúrico y b) la formación intracelular de especies reactivasdel oxígeno (ROS), utilizando el fluoróforo redox 2´,7´-diclorofluoresceína.Todos los inhibidores de MAPKs previnieron significativamente la LPOy la formación de ROS inducidas por tBOOH. En el modelo de HAPR, laperfusión con tBOOH (75 μM, 10 min) redujo significativamente el flujobiliar (-73±13%, p<0.001), mientras que la perfusión previa con losdiferentes inhibidores de MAPKs previno significativamente esta caída:PD (5 μM; +55±18%; p<0,001), SP (1 μM; +47±23%; p<0,001) y SB (250nM; +45±16%; p<0,001). Se evaluó además la mediación de MAPKs enel efecto deletéreo de tBOOH sobre la función secretora de los transporadorescanaliculares Bsep (bomba exportadora de sales biliares) y Mrp2(proteína asociada a la resistencia a multidrogas 2), responsables de laformación de bilis dependiente e independiente de sales biliares. Paraello, se monitoreó la excreción biliar del sustrato de Bsep taurocolato (TC)y del sustrato de Mrp2 dinitrofenilglutation (DNP-SG), generado dentrodel hepatocito a partir de su precursor 1-cloro-2,4-dinitrobenceno(CDNB) administrado exógenamente. La perfusión con tBOOH (75 μM,10 min) redujo significativamente la excreción de TC (-64±14%, p<0.001)y de DNP-SG (-60±9%, p<0.001), mientras que la pre-perfusión con losinhibidores de MAPKs PD (5 μM), SP (1 μM) y SB (250 nM) logró preveniresta disminución, independiente del sustrato analizado. Concluimos quelas MAPKs de tipo p38MAPK, ERK 1/2 y JNK 1/2 participan parcialmenteen las alteraciones de la función secretora biliar inducidas por tBOOH,previniendo la generación de ROS y la consecuente inhibición de la funciónde transporte responsable de la generación de bilis