Concentraciones fisiológicas de bilirrubina no conjugada (BNC) previenen la injuria oxidativa hepatocelular

BASIGLIO, CL; TOLEDO, FD; ARRIAGA, SM; SÁNCHEZ POZZI, EJ; OCHOA, JE; MOTTINO, AD; ROMA, MG

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2012

SAFIS

La BNC es considerada actualmente un importante antioxidanteendógeno con propiedades citoprotectoras, y diversos estudiosdestacan su valor potencial en el tratamiento de numerosas patologíaspro-oxidantes. El estrés oxidativo (EO) está involucrado en lapatogénesis de la mayoría de las enfermedades hepáticas. Nuestrogrupo y otros han demostrado que el EO provoca colestasis por internalizaciónendocítica de transportadores canaliculares claves parala secreción biliar (Bsep, Mrp2), vía redistribución de actina. En estetrabajo, evaluamos la capacidad de BNC para limitar el EO y las alteracionesen la función secretora biliar inducida por el agente pro-oxidantemodelo tert-butilhidroperóxido (tBOOH). Hepatocitos aisladosde rata se pretrataron con una concentración fisiológica de BNC (17μM) y luego con tBOOH (100 μM). BNC previno completamente laformación de especies reactivas del oxígeno (ROS) inducida portBOOH, evaluada con la sonda intracelular fluorescente 2´,7´-diclorofluoresceína(p<0,05; n=4). BNC previno en 40% la lipoperoxidaciónde membrana inducida por tBOOH, evaluada por la formación desustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS), en aprox. un 40%(p<0,05; n=4). Se aislaron hígados de rata y se perfundieron in situcon BNC (2,1 μM; 15 min), y luego con tBOOH (75 μM; 10 min). tBOOH,administrado solo, produjo una caída aguda del flujo biliar (0,75±0,2vs. 1,5±0,3 μl/min/g híg.), así como un aumento abrupto (250 veces)de la excreción de glutatión oxidado. BNC previno completamenteambas alteraciones (p<0,05; n=5). Asímismo, BNC previno la caídainducida por tBOOH en la excreción de taurocolato, sustrato de Bsepen un 60% (p<0,05; n=4), y de dinitrofenilglutation, sustrato de Mrp2en un 90% (p<0,05; n=4). En duplas aisladas de hepatocitos de rata,tBOOH (100 μM) disminuyó la capacidad de las duplas para secretarlos sustratos fluorescentes de Bsep (colil-lisil-fluoresceína) y de Mrp2(glutation-metil-fluoresceína). BNC (17 μM) previno esta disfunciónen un 70% (p<0,05; n=4), cualquiera sea el sustrato utilizado. Inmunomarcadode Bsep y Mrp2 seguido de microscopía confocal y análisisde imagen revelaron que tBOOH (100 μM) indujo internalizaciónde estos transportadores, y que el pre-tratamiento con BNC (17 μM)previno significativamente estas alteraciones. Se indagó la capacidadde BNC para prevenir la desorganización de actina, evaluadamediante la formación de ampollas (“blebs”) de membrana plasmática(por contraste de fase) y por la redistribución de actina marcadacon faloidina-Cy3 (por microscopia confocal y análisis de imagen).BNC redujo el aumento de duplas exhibiendo “blebs” inducido portBOOH (67,8±1,1 vs. 30,0±1,5 %; p<0.05). Asímismo, BNC previno laredistribución de actina en un 50%. Concluimos que BNC previene ladisfunción secretora biliar inducida por EO, al prevenir la desorganizaciónde actina y la consecuente internalización de transportadorescanaliculares relevantes para la secreción biliar.