Las elevaciones de calcio exacerban el daño hepatoclular inducido por estrés oxidativo facilitando la formación de poros de transición de permeabilidad mitocondiral vía calcio-calmodulina

G ROMA, MARCELO; PEREZ, LEONARDO MARTÍN; ELENA OCHOA, J; SANCHEZ POZZI, EJ

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Hepatología; 2005

El estrés oxidativo es un evento común a un gran número de hepatopatías, incluyendo isquemia post-transplante, alcoholismo, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis biliar primaria y otras hepatopatías que conducen a la acumulación de hierro. El estrés oxidativo induce la formación de poros de transición de permeabilidad mitocondrial (PTPM) y peroxidación de lípidos de membrana, entre otras alteraciones; dichas perturbaciones inician un círculo vicioso de exacerbación/perpetuación del daño oxidativo inicial. Aunque se conoce que las elevaciones de calcio (Ca2+) intracelular juegan un papel permisivo en estos eventos, el/los mecanismos subyacentes son desconocidos. En este trabajo, examinamos si la activación de cascadas de señalización intracelular dependientes de Ca2+, incluyendo las dependientes de proteína kinasa C (PKC) y de Ca2+-calmodulina (CM), están involucradas en el efecto pro-oxidante del Ca2+. Para ello, analizamos la capacidad de antagonistas específicos de tales vías de señalización para contrarrestar tanto la lipoperoxidación de membranas como la formación PTPM inducidas por el compuesto pro-oxidante modelo tert-butil hidroperóxido (tBOOH). tBOOH (500 μM, 15 min) indujo lipoperoxidación, evidenciada por un incremento del 723 % (p<0.001) en la generación de especies reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS); ciclosporina A (5 μM), un inhibidor de PTPM, parcialmente previno este efecto (-22%, p<0.025). La quelación del Ca2+ intracelular con BAPTA/AM (50 μM) o la inhibición de CM con W7 (100 μM) redujeron en una magnitud similar la formación de TBARS inducida por tBOOH (-28 %; p<0.01). La formación de PTPM inducida por tBOOH fue finalmente analizada midiendo la despolarización de la membrana mitocondrial, un evento dependiente de la formación de PTPM, utilizándose para ello tetrametil-rodamina metil éster como sonda fluorescente. La formación de PTPM fue también similarmente contrarrestada por BAPTA/AM y por W7 (aprox. –30%, p<0.025). Ni el inhibidor de PKC estaurosporina (100 μM) ni el inhibidor de la proteína kinasa II dependiente de CM calmidazolium (5 μM) modificaron la generación de TBARS inducida por tBOOH. Por su parte, el inhibidor de calpaína I (50 μM) tampoco tuvo efecto, descartándose la participación de esta proteasa dependiente de CM.CONCLUSION: Concluimos que las elevaciones de Ca2+ exacerban el daño hepatocelular oxidativo vía formación del complejo CM. Moléculas de señalización y/o moléculas efectoras dependientes de CM aún no identificadas parecen mediar este fenómeno. Se encuentran en progreso investigaciones conducentes a identificar los mediadores/efectores que actúan cascada abajo de CM.