Aplicación de proteínas citosólicas de Brucella al diagnóstico de la brucelosis caprina.

PABLO CESAR BALDI; GC RACARO,; LUIS SAMARTINO,; ALEJANDRO VELIKOVSKY, CARLOS

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Microbiología; 1998

Las pruebas serológicas más utilizadas para el diagnóstico de la brucelosis caprina son la aglutinación de Rosa de Bengala, la aglutinación lenta en tubo, con o sin 2-mercaptoetanol (2ME-SAT y SAT, respectivamente), la fijación de complemento y la prueba ?buffered plate antigen? (BPA). Todos estos ensayos detectan anticuerpos (Ac) contra lipopolisacárido bacteriano (LPS), lo cual genera problemas de reactividad cruzada con otras bacterias gramnegativas. Como alternativa a estas pruebas, nuestro grupo ha estudiado la posible aplicación de las proteínas citosólicas de Brucella al diagnóstico de la brucelosis en distintas especies animales. Para ello, hemos diseñado sendos ELISAs indirectos con un extracto total de proteínas citosólicas de Brucella libre de LPS (CP) y con una proteína citosólica de 18 kDa, obtenida en forma recombinante (p18). El objetivo de este estudio fue determinar la performance de estos ensayos para el diagnóstico de la brucelosis caprina, en comparación con la detección de Ac anti-LPS por ELISA y por serología convencional. En los ELISAs con proteínas, ambos antígenos fueron adsorbidos a razón de 0.5 µg/pocillo y los sueros se ensayaron diluidos 1:100. Como conjugado se utilizó un suero anti-Ig de cabra unido a peroxidasa y la reacción se reveló con o-fenilendiamina/H2O2. Para la determinación de Ac anti-LPS por ELISA se utilizó un sistema de captura antigénica con un Ac monoclonal específico. En la puesta a punto de los ELISAs se utilizaron 28 sueros de cabras libres de brucelosis y 10 sueros de animales con infección confirmada por B. melitensis. Con los ensayos puestos a punto se analizaron los sueros de 37 cabras de un hato de Mendoza, 70 de un hato de Tucumán y 44 de un hato de La Rioja. De los 37 sueros de Mendoza, correspondientes a un hato afectado por una epidemia de infección por B. melitensis, 27 (73%) resultaron positivos por BPA y 28 (76%) lo fueron por ELISA con antígeno CP. Existió una sola discrepancia entre los ensayos, por un suero negativo en BPA y positivo por ELISA. Por escasez de volumen estos sueros no pudieron ser ensayados con los otros ELISAs. Los sueros de Tucumán y La Rioja fueron ensayados por 2ME, BPA y por ELISA para Ac anti-LPS y anti-p18. Todos los sueros tucumanos fueron negativos en 2ME y BPA, pero 28 muestras (40%) fueron positivas para Ac anti-LPS y 4 (6%) fueron positivas también para Ac anti-p18. En el hato de La Rioja, los porcentajes de positividad fueron 39% para BPA y 2ME, 77% para anti-LPS y 18% para anti-p18. Las 26 discrepancias entre los ELISAs anti-LPS y anti-p18 se debieron a resultado positivo en el primero y negativo en el segundo. Estos resultados preliminares sugieren que, en los hatos caprinos con niveles de infección alto o bajo, la sensibilidad y especificidad de los ELISAs anti-proteínas son similares a las de la serología convencional. En los hatos con niveles intermedios de infección, la frecuencia de resultados positivos para Ac anti-LPS (especialmente por ELISA) es mayor que la de Ac anti-p18. Estas últimas muestras podrían corresponder a animales con infección pasada que conservan niveles residuales de Ac anti-LPS o a animales actualmente infectados que no presentan Ac anti-proteínas. Para aclarar este punto, nos proponemos aplicar estos ensayos al análisis de un número importante de sueros provenientes de animales cuyo estado sanitario sea perfectamente conocido.