INVESTIGADORES
BALDI Pablo Cesar
congresos y reuniones científicas
Título:
La proteína Omp31 de Brucella spp. es un receptor de hemina.
Autor/es:
DELPINO, MARIA VICTORIA; JULIANA CASSATARO,; A FOSSATI, CARLOS; PABLO CESAR BALDI
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología.; 2004
Resumen:
Las bacterias Gram-negativas han
desarrollado diversas estrategias para obtener hierro de su hospedador,
incluyendo la expresión de receptores para hemina (RH) en la membrana externa.
Hasta el momento no se han descripto RH en Brucella
spp. Sin embargo, se ha detectado en Bartonella
quintana un RH denominado HbpA, que tiene un 31,7% de identidad secuencial
con la proteína de membrana externa Omp31 de Brucella spp. Nuestro objetivo fue evaluar si Omp31 funciona como
RH en Brucella. Una forma
recombinante de Omp31 obtenida en nuestro laboratorio fue corrida en SDS-PAGE,
transferida a nitrocelulosa e incubada con una solución de hemina (150 µg/ml).
En estas condiciones, la unión de hemina puede observarse a simple vista. La hemina
se unió específicamente a Omp31 y a albúmina bovina (carrier fisiológico de la
hemina, control positivo), pero no a un anticuerpo monoclonal irrelevante usado
como control negativo. Para determinar si Omp31 en conformación nativa (sin
SDS) se une a hemina, se incubó a la proteína con hemina-agarosa, se lavó la
resina, y se eluyeron las proteínas unidas (con buffer muestra de SDS-PAGE). El
análisis electroforético demostró que Omp31 también se une a hemina-agarosa en
fase fluida. Para evaluar si la expresión de Omp31 está regulada por los
niveles de hierro, se cultivó Brucella
suis en caldo tripticasa soya (TSB) normal y en TSB deplecionado de hierro
con el quelante 2,2?-dipiridil. La expresión de Omp31 en células cosechadas a
las 48 horas se evaluó por Western blot usando un suero específico anti-Omp31.
Se observó una reactividad significativamente mayor en el lisado de la bacteria
crecida con 2,2?-dipiridil, lo cual demuestra que la expresión de Omp31 es
inducible por deficiencia de hierro. Omp31 está presente en todas las especies
de Brucella, excepto en B. abortus. Para determinar si la
ausencia de Omp31 limita la capacidad de B.
abortus de crecer con hemina como única fuente de hierro, se cultivó la
bacteria en TSB normal, TSB con quelante, y TSB con quelante más hemina. A los
fines comparativos se cultivó B. suis
en paralelo en las mismas condiciones. El crecimiento de ambas especies se
redujo notablemente por la deficiencia de hierro en comparación con las
condiciones control. El agregado de hemina restauró el crecimiento en grado
similar en ambos casos, lo cual indica que Omp31 no es esencial para la
captación de hemina por B. abortus y
sugiere la existencia de otros RH en esta especie. Esta hipótesis fue
confirmada al incubar la fracción de membrana externa de B. abortus con hemina-agarosa, detectándose al menos 2 proteínas
con propiedades de RH. Este estudio demuestra que Omp31 actúa como RH en las
especies de Brucella que la expresan,
y que en B. abortus, que carece de
esta proteína, su función es reemplazada por otros RH.