Cromatografía de Intercambio Iónico Multivalente

JUIZ, FEDERICO; MARIANO GRASSELLI

La Plata

Simposio; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008

Sociedad Argentina de Biofísica

Este trabajo se centra en el estudio de ligandos polivantes en cromatografía de intercambio iónico. Matrices comerciales intercambiadoras de aniones, como Q o DEAE-Sepharose, son ampliamente utilizadas en la purificación de proteínas, tanto a nivel laboratorio como industrial. En los últimos años se han detectado, a través de estudios de microscopia confocal, importantes efectos de la distribución y densidad de ligando sobre la capacidad de adsorción de estas matrices [1] [2].En esta primera etapa se estudio el efecto de la matriz sobre la adsorción de una proteína modelo (BSA, bovine serum albumin) utilizando como ligando de intercambio iónico el EDA (etilendiamina, como ligando de intercambio iónico divalente). Se sintetizaron (a) una matriz de celulosa, por injerto con N,N´-dimetilacrilamida (N,N´-DMA) y glicidil-metacrilato (GMA) [3][4]; (b) Sepharose comercial con el mismo protocolo de injerto que (a); (c) Sepharose comercial con activación química con alil-glicidil-eter (AGE) [5][6]. Los resultados se muestran en la Tabla 1 donde se observa que, en el caso de celulosa y utilizando EDA como ligando modelo, se obtiene una Qmax importante pero la constante de disociación (Kd) fue muy alta (muy pobre interacción con la proteína) en comparación al estándar (DEAE-Sepharose). Por otro lado, la matriz producto de un injerto sobre Sepharose presentó muy baja Qmax. La matriz que mejor se comportó en comparación con el estándar fue la activada químicamente, o sea la (c), En una segunda etapa, se realizaron 3 tipos de matrices siguiendo la metodología (c) con EDA, trietilentetramina y pentaetilenhexamina como ligando. Las isotermas de Langmuir para BSA de estas matrices mostraron una tendencia hacia menores constantes de disociación al aumentar el número de cargas electrostáticas en el ligando.