TIPS DE MICROPIPETAS MODIFICADOS PARA PURIFICACIÓN DE FRAGMENTOS DE DNA

MIRNA LORENA SANCHEZ; CLAUDIA GIMENEZ; LEANDRO J MARTINEZ; RADRIZZANI, M.; GRASSELLI, M.

Bernal

Jornada; IV JORNADAS DE INVESTIGADORES EN FORMACION CYT UNQ; 2021

Universidad Nacional de Quilmes

En el presente trabajo se describe el desarrollo de una punta de micropipeta funcional para la purificación de ADN, llamada DNAtip, basada en un novedoso. El recubrimiento funcional se desarrolló mediante un revestimiento interno de las paredes del tip de micropipeta con una película de alcohol polivinílico (PVA) con partículas de sílica. La capa de revestimiento se estabilizó mediante crosslinking inducido por radiación gamma para evitar su disolución. Se estudiaron tres tipos de partículas de sílice de diferentes diámetros: micrónico, submicrónico y nano. Además, se optimizó el pH de la solución de revestimiento y la concentración de partículas de sílica. Las puntas recubiertas con sílica del tipo ?fumed? mostraron la mayor capacidad de absorción para ADN plasmídico con una pureza aceptable. Se emplearon diferentes fragmentos de ADN doble cadena lineal para evaluar la capacidad de absorción y la discriminación de tamaño de los fragmentos. Se midió la recuperación en el rango de 700 ng y 200 ng por punta para fragmentos de ADN doble cadena en el rango de 400 bp a 2 kbp y 50 bp a 500 bp, respectivamente. Fragmentos de ADN obtenidos por PCR y contaminados con BSA se purificaron con calidad suficiente para ser posteriormente secuenciados o digeridos enzimáticamente de forma exitosa [1].