Expresión y rol funcional del receptor nicotínico alfa7 neuronal en células citotóxicas naturales.

ZANETTI, S.; DIONISIO L; ZIBLATT; ZWIRNER, N; BOUZAT CECILIA

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2013

El receptor nicotínico alfa7 (α7) se encuentra en sistema nervioso donde media la entrada de calcio en respuesta a acetilcolina. Interviene en cognición, plasticidad sináptica, y neuroprotección. Además, se lo ha detectado en células no neuronales, donde su rol es menos claro. Se ha postulado que en linfocitos T y B podría ejercer un rol inmunomodulador. En este trabajo investigamos la expresión de α7 y su posible rol funcional en células citotóxicas naturales (NK) humanas. Mediante PCR y PCR en tiempo real detectamos expresión de mRNA α7, indicando que estas células también expresan 7. Dicha expresión aumenta aproximadamente 3 veces en células NK activadas. En esta condición, las células NK también expresan colina acetiltransferasa, enzima involucrada en la síntesis de ACh. Para determinar la presencia del receptor en membrana plasmática evaluamos la unión de α-bungarotoxina-Alexa488 (α-Bgt, antagonista específico de α7) por microscopía confocal y citometría de flujo. Observamos que las células NK en reposo unen Bgt, pero la intensidad de fluorescencia aumenta luego de la estimulación. Además, mediante microscopía confocal y utilizando la sonda Fluo‐3/AM detectamos un aumento de la fluorescencia de 1,5-2,5 veces con respecto al basal luego del agregado de nicotina (agonista nicotínico) en células NK activadas, demostrando así que los canales de α7 son funcionales dado que median ingreso de calcio. Por último, al incubar células NK con IL‐12, IL‐18 e IL‐15 observamos una disminución en la producción de IFN- en presencia 10 µM de nicotina. Este efecto se incrementa en presencia de PNU-120596, que actúa como potenciador de α7. Estos resultados sugieren que las células NK síntetizan ACh y expresan receptores 7, y dichos procesos se incrementan en células activadas. Los receptores α7 modularían la funcionalidad de las células NK durante su activación por citoquinas de relevancia durante el diálogo recíproco con células dendríticas, lo que podría repercutir en la inmunidad anti-tumoral y anti-viral, donde las células NK juegan un rol clave.