Localización Mitocondrial de Ferredoxina-NAD(P)H Oxidorreductasa en Trypanosoma cruzi

MANARIN, ROMINA; GIRARDINI, JAVIER; UTTARO, ANTONIO D.; SERRA, ESTEBAN C.

Mendoza

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2005

Las ferredoxina- NADP(H) oxidorreductasas (FNR) son flavoenzimas ampliamente distribuidas entre eucariotas y procariotas que catalizan el intercambio reversible de electrones entre NADP(H) y ferredoxinas (Fd) o flavodoxinas (Fld). Las FNR se dividen en dos grupos: tipo planta y tipo mitocondria. Estas enzimas presentan además actividad diaforasa, que consiste en la reducción de una gran variedad de aceptores de electrones. Aunque el rol biológico del sistema FNR/Fd no está totalmente dilucidado, podría estar involucrado, entre otras cosas, en procesos de detoxificación de especies reactivas del oxígeno (ERO), metabolización de xenobióticos, e incluso, en la activación de compuestos nitroheterocíclicos. Una búsqueda sobre las secuencias genómicas de Trypanosoma cruzi reveló la presencia de dos CDS con similitud a FNR y Fd tipo mitocondria, con putativos péptidos de transporte en sus extremos 5', Ambas secuencias fueron amplificadas, expresadas en Escherichia coli como proteínas de fusión a cola de histidinas y las proteínas recombinantes obtenidas se utilizaron para preparar anticuerpos en conejos. Ensayos de western blot, demostraron la expresión de ambas proteínas en extractos totales de T cruzi. Mediante inmunocitolocalización, se determinó la localización mitocondrial de ambas enzimas. Mediciones de actividad en gel determinaron que existen tres actividades diaforasa en extractos de T. cruzi. El análisis de extractos de fraccionamientos subcelulares generados por incubación con concentraciones creciente de digitonina determinó que una de estas actividades se encuentra exclusivamente en las fracciones mitocondriales. La baja movilidad electroforética de esta actividad coincidió con la esperada, teniendo en cuenta el PI (8,66) de TcFNR