Rol de PTP1B en la reaccion acrosomal de espermatozoides humanos

TOMES C, ZARELLI V, ROGGERO CM Y MAYORGA L

Mendoza

Jornada; XX Jornadas de Investigacion y II de Posgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2006

Universidad Nacional de Cuyo

La fertilizacion depende, entre otras cosas, de la fusion del acrosoma con la membrana plasmatica del espermatozoide, conduciendo al proceso exocitico llamado reaccion acrosomal (RA). En una variedad de sistemas, la exocitosis depende significativamente de la fosforilacion de proteinas, un proceso dinamico en el cual el estado de fosforilacion refleja la accion competitiva entre quinasas y fosfatasas. Por medio de inhibidores y anticuerpos especificos, vimos que proteinas fosfatasas y quinasas de tirosina (PTP y PTK, respectivamente) juegan un rol central en la reaccion acrosomal. Utilizando anticuerpos monoclonales especificos, demostramos por primera vez la presencia de PTP1B, una PTP soluble, en extractos de espermatozoides humanos y de raton. Por inmunofluorescencia indirecta se detecto que PTP1B se localiza en la pieza media del flagelo y en el segmento ecuatorial del espermatozoide humano. Nuestro laboratorio ha desarrollado un modelo de espermatozoides humanos donde la membrana plasmatica se permeabiliza con estreptolisina O.  Este tratamiento permite ingresar libremente dentro de la celula moleculas a las cuales la membrana plasmatica es normalmente impermeable, como por ejemplo iones, proteinas, anticuerpos, etc. Tanto calcio como Rab3A recombinante persistentemente activada con GTP-gama-S inducen la RA en espermatozoides humanos permeabilizados.  Observamos inhibicion de la misma, ya sea disparada por calcio o por Rab3A, cuando utilizamos un anticuerpo anti-PTP1B o una mutante de PTP1B carente de actividad catalitica, indicando el requerimiento de esta fosfatasa para la exocitosis. Inhibidores especificos fotosensibles, nos permitieron determinar que la PTP1B es requerida a posteriori del tethering dependiente de Rab3 y previo a la salida del calcio acrosomal.  En este momento nos hallamos abocados a la identificacion de sustratos de esta fosfatasa, asi como su regulacion durante la exocitosis.