.¿La actividad de CaMKII se modifica por oxidación en la isquemia y reperfusión miocárdica?

ROMÁN B; HERRERO MA; BECERRA R; VITTONE L; SAID M; MUNDIÑA - WEILENMANN C

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS)

La proteína quinasa dependiente de calcio (Ca2+) y calmodulina (CaMKII) ha sido involucrada en distintos procesos patológicos cardíacos. Su activación iniciada por unión al complejo Ca2+-calmodulina, puede sostenerse por autofosforilación del residuo Thr286 (pCaMKII) y/o por la recientemente descripta oxidación de sus residuos Met281/282 (CaMKIIox). En la reperfusión luego de un período breve de isquemia, CaMKII se activa, se autofosforila y fosforila Thr17 de fosfolamban (PLN) -proteína reguladora de la retoma de Ca2+ por el retículo sarcoplasmático (RS)- y Ser2815 del canal liberador de Ca2+ del RS (RyR2). Estas fosforilaciones favorecen la recuperación del ciclado de Ca2+ y la contractilidad del miocardio post-isquémico. Dado que la reperfusión cursa con aumentos de Ca2+ y del estrés oxidativo, nuestro objetivo fue estudiar si CaMKII se oxida y si esta modificación mantiene la actividad de la enzima y sus consecuencias funcionales en IR. Corazones perfundidos de rata (Langendorff) se sometieron a un protocolo de 20 min de isquemia global seguidos de reperfusión (IR) durante el cual se midió la recuperación mecánica en presencia y ausencia de un secuestrador de anión superóxido, Tirón (Ti, 1mM). Las fosforilaciones dependientes de CaMKII y la CaMKIIox en RS se evaluaron por Westernblot y se expresan como % control. CaMKIIox aumentó significativamente al inicio de la reperfusión (163±37%, n=5, p<0,05) y Ti suprimió este aumento (104±6%, n=3). El tratamiento con Ti no modificó el aumento de pCaMKII (IR-Ti:213±13 vs. IR:183±27%, n=3-6), ni la fosforilación de Thr17-PLN y Ser2815-RyR2. Finalizado el protocolo de IR, la presión desarrollada por el ventrículo izquierdo fue similar en corazones con y sin Ti (44,5±4,6 y 53,7±8,1% de preisquemia, n=3-6, respectivamente). Los resultados demuestran que si bien CaMKII se oxida en IR, la modificación de su estado redox no incide en la actividad de la enzima y sus consecuencias funcionales durante la IR.