ESTUDIO FUNCIONAL DE LA MODULACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NF-kappaB POR PROTEÍNAS FKBPs

DE LEO SA, MAZAIRA G, MOLINARI AM, GALIGNIANA MD, ERLEJMAN AG

Mar del Plata

Congreso; LVII Reuni¨®n Anual de SAIC; 2012

El factor de transcripci¨®n NF-¦ÊB (Rel A/p50) regula genes involucrados en la inflamaci¨®n, diferenciaci¨®n, muerte celular y promoci¨®n de tumores. Su activaci¨®n es mediada por la fosforilaci¨®n del inhibidor l¦ÊB y posterior degradaci¨®n, lo que libera a NF-kB para translocar al n¨²cleo. Previamente observamos que las FK506-binding proteins (FKBPs) modulan la actividad transcripcional NF-¦ÊB. Las FKBPs se caracterizan por presentar un dominio con actividad enzim¨¢tica de peptidil-prolil-cis/trans-isomerasa (PPIasa) y un dominio TPR (series de 34 amino¨¢cidos) de interacci¨®n con otras prote¨ªnas. Resultados previos del laboratorio demostraron que la prote¨ªna FKBP51 es capaz de inhibir la activaci¨®n de NF-kB inducida por PMA (¨¦ster de forbol), mientras que FKBP52 estimula su activaci¨®n, en forma PPIasa dependiente. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto funcional de esta modulaci¨®n. Para ¨¦sto se realizaron ensayos de gen reportero para NF-¦ÊB en c¨¦lulas HEK 293T estimuladas con PMA, y se observ¨® que el efecto de FKBP52 fue revertido por cotransfecci¨®n con FKBP51. Se logr¨® transfectar en forma estable c¨¦lulas HEK 293 (no T) con el pl¨¢smido de expresi¨®n pC-Neo-hFKBP51, por selecci¨®n con el antibi¨®tico G418. Al repetir el ensayo de sobreexpresi¨®n de FKBP52 en las c¨¦lulas Hek 293 51+, no se observ¨® estimulaci¨®n en la actividad de NF-¦ÊB inducida por PMA. Adem¨¢s en estas mismas c¨¦lulas se eval¨²o la proliferaci¨®n celular en comparaci¨®n con sus pares wild type (wt), encontr¨¢ndose que la sobreexpresi¨®n de FKBP51 aumenta significativamente la proliferaci¨®n celular. Finalmente encontramos que tanto en las c¨¦lulas Hek 293 51+ como en las wt, Rel A co-inmunoprecipit¨® con FKBP51. Concluimos que FKBP51 y FKBP52 modulan la actividad transcripcional de NF-¦ÊB actuando en forma contrapuesta. Especulamos que el efecto observado sobre la proliferaci¨®n celular podr¨ªa explicar una de las funciones biol¨®gicas de las FKBPs en c¨¦lulas tumorales donde FKBP51 se encuentran sobreexpresada.