Identificación molecular de Rickettsia massiliae y Anaplasma platys en garrapatas Rhipicephalus sanguineus colectadas en el barrio Los Piletones, Villa Soldati

GUILLEMI, E.C.; MARTINEZ VIVOT, M.; ALVAREZ, D; FARBER MD

Buenos Aires

Congreso; Libro de Resúmenes del II Congreso de la Sociedad Iberoamericana de Epidemiología Veterinaria y Medicina Preventiva; 2014

Sociedad Iberoamericana de Epidemiología Veterinaria y Medicina Preventiva

El orden Rickettsiales comprende bacterias cocobacilares Gram-negativas de vida intracelular obligada, transmitidos por vectores artrópodos. Muchas de las bacterias comprendidas en este orden son patógenos de importancia médica y veterinaria. En el marco del proyecto ?Un Mundo una Salud, Prácticas Pre-Profesionales Solidarias en áreas de riesgo sanitario de Villa Soldati?, se llevaron adelante actividades de diagnóstico, prevención y control de enfermedades zoonóticas durante el año 2013. Entre las actividades desarrolladas, se recolectaron muestras de garrapatas R. sanguineus (garrapata común del perro) de los caninos que acudieron al servicio veterinario durante los meses de Octubre, Noviembre y Diciembre con el objetivo de identificar la presencia de bacterias de las familias Rickettsiaceae y Anaplasmataceae. Las garrapatas provenientes de un mismo animal fueron clasificadas en 2 grupos discriminando únicamente entre machos y hembras, de manera que con el total de las muestras colectadas se conformaron 15 pooles. Para realizar la extracción de ADN se procedió a pulverizar las garrapatas con nitrógeno líquido y luego se aplicó el método de fenol-cloroformo. La identificación y correcta clasificación de las bacterias del orden Rickettsiales, se llevó adelante aplicando diferentes protocolos de PCR. Para la identificación de la familia Rickettsiaceae se amplificaron los genes gltA, ompA, htrA y ompB, en cambio, la familia Anaplasmataceae fue identificada amplificando un fragmento del gen 16S rRNA.Tres de los 15 pooles resultaron positivos a las reacciones de PCR para los genes gltA, htrA, ompA y ompB, y dos de esos tres pooles resultaron además positivos a la amplificación del gen 16S rRNA. Las reacciones positivas fueron purificadas y enviadas a secuenciar. Se recibieron los archivos conteniendo los electroferogramas provenientes del servicio de secuenciación con los que se construyeron los contigs. Posteriormente y utilizando la herramienta BLAST, se compararon los archivos en formato FASTA contra las bases de datos GenBank del NCBI (National Center forBiotechnologyInformation). Para los genes gltA, htrA, ompA y ompB en las muestras de los tres pooles se obtuvo un 100% de identidad con las secuencias correspondientes a los mismos genes de Rickettsia massiliae. El fragmento amplificado del 16S rRNA resultó 99 % similar a las secuencias de Anaplasma platys depositadas en el NCBI.Ambas especies bacterianas identificadas en el presente trabajo fueron recientemente consideradas de riesgo para el humano. Si bien R. sanguineus tiene preferencia por alimentarse de caninos, se ha verificado que todos los estadios de esta especie de garrapata parasitan humanos. A su vez, existen reportes recientes en los que se informa la presencia de R. massiliae y A. platys en R. sanguineus en otras áreas de la ciudad, por lo que resulta de suma importancia realizar un amplio relevamiento de la presencia de estos patógenos de riesgo sanitario en garrapatas del ámbito urbano.