Identificación de la familia de proteínas del tipo Perforina en Babesia bigemina

PETRIGH R; REGO N; VALENTINI B ; ECHAIDE I; ROMERO H; NAYA H; FARBER M

Ascochinga

Encuentro; XXIV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

Sociedad Argentina de Protozoologia

Identificación de la familia de proteínas del tipo Perforina en Babesia bigemina   Romina Petrigh, Natalia Rego, Beatriz Valentini, Ignacio Echaide, Héctor Romero, Hugo Naya, Marisa Farber.     Las perforinas, componentes ancestrales del repertorio de proteínas involucradas en la interacción patógeno-hospedador por contener el dominio de ataque a membrana (MACPF), han sido inicialmente caracterizadas en mamíferos (C6-C9 del sistema del complemento y las perforinas de los linfocitos T-citotóxicos). En el Phylum Apicomplexa han sido reportadas proteínas con dominio MACPF. En el género Plasmodium se ha reportado una  familia de cinco proteínas del tipo Perforina (Perforin- like protein –PLP-)  y en Toxoplasma gondii  dos proteínas con dominio MACPF que están  involucradas en el egreso del parásito de la célula huésped. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar esta familia de proteínas en el parasito que infecta eritrocitos de bovino Babesia bigemina (B. bi) perteneciente al Phylum Apicomplexa. Dado que el ensamblado y la anotación del genoma de B. bi aún no se ha concluido, utilizamos tanto herramientas in silico  como moleculares para completar una anotación curada de los genes plp. Las PLPs en B. bi fueron identificadas a partir de los dominios MACPF de Babesia bovis (B. bo)  por TBLASTN. El inicio y finalización de los genes se determinó utilizando los programas FGNESH y Glimmer HMM, entrenados con P. falciparum y B. bo respectivamente. Las secuencias codificantes se verificaron por SMART. Se anotaron ocho secuencias codificantes con dominio MACPF de B. bigemina.  A continuación, se llevaron a cabo experimentos de secuenciación y transcripción que confirmaron las predicciones in silico y permitieron establecer los patrones de expresión. Los resultados fueron comparados con los de los genes plp de B. bo. Además,  se realizó la reconstrucción filogenética de esta familia de proteínas en Piroplasmida (Babesia spp. and Theileria spp.) y Haemosporida (Plasmodium spp.) por Máxima verosimilitud. Demostramos la transcripción de todos los genes Bbiplp y Bboplp en el estadio intraeritrocítico. El árbol filogenético obtenido muestra una historia evolutiva compleja, con eventos que ocurrieron tanto antes como a posteriori de la duplicación y divergencia Piroplasmida- Haemosporida. La particular estructura de la familia de PLPs en Babesia y las potenciales implicancias del rol funcional en los diferentes estadios estimulan la profundización de los estudios para contribuir a dilucidar la interacción hospedador-patógeno.