Multilocus Sequence Typing (MLST) para la tipificación molecular de Anaplasma marginale.

GUILLEMI E; PRINCIPI D; DELFINO S; WILKOWSKY S; FARBER M; RUYBAL P

Montevideo

Congreso; XX Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2010

Sociedad Uruguaya de Microbiología

Multilocus Sequence Typing (MLST) para la tipificación molecular de Anaplasma marginale. Guillemi E1, Principi D1, Delfino1 S, Wilkowsky S1, Farber M1, Ruybal P1. 1.   Instituto de Biotecnología, INTA, Buenos Aires, Argentina. eguillemi@cnia.inta.gov.ar Para el estudio epidemiológico de Anaplasma marginale es necesario contar con un sistema de tipificación altamente reproducible y discriminativo. Solo dos marcadores moleculares han sido descriptos y aplicados en este tipo de análisis (filogeográfico MSP4 y de genotipo MSP1). El objetivo de este trabajo fue desarrollar la estrategia MLST para lograr obtener una descripción más precisa de la estructura poblacional de este patógeno en bovinos infectados. Los genes seleccionados para esta estrategia fueron: dnaA, ftsz, groEL, lipA, recA, secY y sucB. Estos genes están distribuidos en el genoma, son de copia única y presentan una relación dn/ds menor a uno. Los iniciadores utilizados para la amplificación por PCR de las regiones en estudio de estos 7 genes son específicos para A. marginale. La variabilidad de estos 7 genes fue estudiada a través del análisis de SNPs en las 5 secuencias genómicas disponibles (Saint Marie, Mississippi, Puerto Rico, Florida y Virginia), 2 aislamientos de E.E.U.U. (Oklahoma y South Idaho), 5 aislamientos argentinos de referencia (Mercedes, Virasoro, Salta, Rosali y Quitilipi) y 17 aislamientos de campo de Argentina. Dichos aislamientos provienen de bovinos crónicamente infectados distribuidos en la región enzoótica para la enfermedad (Norte Argentino). En un total de 30 aislamientos estudiados se obtuvieron 28 perfiles alélicos diferentes. El análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas (Neighbor-joining-Kimura-2-parámetros) agrupó separadamente los aislamientos argentinos de los de América del norte. Sin embargo, la topología del dendograma obtenido indicaría posibles eventos de recombinación entre diferentes poblaciones del patógeno. Por este motivo, se llevó a cabo un análisis para definir complejos clonales mediante el uso del software eBurst V3 definiendo como el “founding genotype” al perfil alélico correspondiente al ST18. Los tres complejos clonales resultantes no incluyeron 17 de los 28 STs obtenidos pudiendo deberse a la dispersión geográfica de los aislamientos y sugiriendo la necesidad de sumar más muestras geográficamente relacionadas al análisis.