EVALUACIÓN DE LA EXPOSICIÓN A ESTRÓGENOS AMBIENTALES, A TRAVÉS DE LA DETECCIÓN DE VITELOGENINA DE CAIMAN LATIROSTRIS (YACARÉ OVERO)

REY FLORENCIA; RAMOS JORGE G; STOKER CORA; LUQUE ENRIQUE H; MUÑOZ-DE-TORO MÓNICA M

Santa Fe, Argentina

Jornada; III ENCUENTRO BIOQUÍMICO DEL LITORAL. VI Jornadas de Comunicaciones Técnico-Científicas, UNL.; 2005

Universidad Nacional del Litoral

En los últimos años se ha puesto en evidencia que un número cada vez mayor de compuestos químicos posee actividad agonista de los estrógenos (xenoestrógenos) con potenciales consecuencias en la salud tanto de animales como del hombre. En nuestro país los ecosistemas hídricos están amenazados por contaminantes agroindustriales con actividad hormonal. La selección de especies centinelas y de biomarcadores es crítica para el diseño de estrategias de evaluación de contaminación ambiental. La vitelogenina (Vtg) es una proteína producida en hígado de especies ovíparas en respuesta a estrógenos. Nuestro objetivo fue desarrollar un ELISA para detectar Vtg de yacarés y validar su uso como biomarcador de contaminación ambiental por xenoestrógenos. Para obtener Vtg plasmática se inyectaron hembras juveniles con una dosis diaria (1mg/kg) de 17b estradiol (E2) durante 7 días. La Vtg se purificó por precipitación con EDTA-MgCl2 seguida de cromatografía de intercambio iónico. Con la Vtg purificada se generaron anticuerpos en conejos. El antisuero se purificó por doble cromatografía de afinidad: unión a proteína A, seguida de unión a matrices ligadas con Vtg. Se diseñó un ELISA de competición por captura de anticuerpo ligando Vtg a fase sólida. El límite de detección del ELISA fue 1 ng/ml, la sensibilidad -0.20 ml/μg y el rango de linealidad de 6 a 1563 ng/ml. La concentración de Vtg en plasma de hembras tratadas con una dosis alta de E2 (7 días con 1mg/kg/día) fue 25.6 mg/ml. La administración a yacarés machos de bajas dosis de E2, una única dosis de 1mg/kg o dos dosis separadas 7 días, indujeron 0.38 mg/ml y 4.65 mg/ml de Vtg en plasma, respectivamente. En machos y hembras juveniles, los niveles basales de Vtg fueron no detectables. El efecto de priming observado en machos demuestra la alta sensibilidad del yacaré a bajas concentraciones de xenoestrógenos. El ELISA desarrollado permitirá monitorear la exposición de poblaciones silvestres de yacaré a estrógenos ambientales y utilizar a esta especie como centinela.