Determinación simultánea de tetraciclina y oxitetraciclina empleando luminiscencia sensibilizada de lantánidos en combinación con métodos quimiométricos (PLS-1)

GABRIELA IBAÑEZ

San Luis

Congreso; XXVI Congreso Argentino de Química; 2006

Asociación Química Argentina

            Tetraciclina (TC) y sus derivados tales como oxitetraciclina (Oxi-TC), clortetraciclina (Clor-TC) y demecloxitetraciclina (DemeCl-TC) constituyen un importante grupo de antibióticos los cuales poseen un amplio rango de actividad contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Además de su empleo en humanos se utiliza ampliamente en veterinaria para el tratamiento de diferentes patologías tales como mastitis bovina y en ocasiones, en bajas concentraciones, como constituyentes del alimento de manera de incrementar la utilización del mismo y de esa manera acelerar el crecimiento animal. Con el objeto de disminuir el desarrollo de resistencia bacteriana es importante evitar el uso innecesario de las mismas, reduciendo así el consumo. Esto requiere métodos de monitoreo para residuos de tetraciclinas en muestras tales como suero, orina, leche huevo y tejidos animales.             En la literatura se encuentra disponible gran cantidad de información acerca de la fluorescencia nativa de estos compuestos y se han desarrollado numerosas metodologías con propósitos analíticos.             Por otra parte, está bien establecido que las tetraciclinas pueden ser detectadas en bajas concentraciones empleando fluorescencia sensibilizada de lantánidos. Las tetraciclinas forman complejos estables con iones Eu (III) los cuales presentan una ancha banda de absorción y una estrecha banda de emisión centrada a 615 nm característica de la transición 5D0®7F2 del ion lantánido.   Los métodos basados en luminiscencia sensibilizada de lantánidos resultan atractivos debido a que la transferencia de energía entre el ligando absorbente y el ion luminiscente da lugar a una intensa y estrecha banda de emisión con un importante corrimiento de Stokes y tiempos de vida en el orden de ms a ms que posibilita implementar técnicas de resolución en el tiempo. Estos factores conducen a un incremento tanto de la sensibilidad como de la selectividad de los métodos.             Por otra parte, las técnicas analíticas que emplean métodos de calibración multivariada constituyen una poderosa herramienta para la determinación simultánea de dos o más analitos mutuamente interferentes, así como de analitos en matrices muy complejas y variables que representan, en sí mismas, una importante interferencia.                         En el presente trabajo se desarrolló un método para la determinación simultánea de  tetraciclina y oxitetraciclina en muestras de suero bovino. Los datos de primer orden provenientes de las curvas de decaimiento del estado excitado del sistema terbio-compuesto de interés (intensidad de luminiscencia-tiempo) se procesaron empleando PLS. En este método PLS emplea los tiempos de vida media como parámetros discriminatorios y realiza la regresión de los decaimientos de la luminiscencia en la concentración de los estándares. El conjunto de calibración se preparó siguiendo un diseño factorial completo a 4 niveles de concentración para cada uno de los componentes (16 muestras de calibración) en el rango de 0 a 0,2 ppm y las 11 muestras binarias de validación resultaron de aplicar un diseño al azar en el mismo rango de concentración, siendo las concentraciones de las mismas diferentes a las empleadas en la calibración. Finalmente, el conjunto de muestra de predicción se preparó adicionando sueros vacunos con cantidades conocidas de los compuestos en estudio de manera de obtener concentraciones finales en el orden de 0 a 5 ppm. En base a los resultados obtenidos podemos concluir que el método desarrollado permitiría la determinación simultánea de TC y oxi-TC en muestras de suero sin necesidad de pretratamiento de la muestra.