Efecto fotodinámico en C. tropicalis de Eosina-Y libre y asociada con un policatión derivado de timina: cuando la supramolecularidad es una ilusión

M.C. SOSA ; J. MARIONI; S.C. NÚÑEZ MONTOYA; C.D. BORSARELLI

San Carlos de Bariloche

Congreso; IV REUNIÓN DE FOTOBIÓLOGOS MOLECULARES ARGENTINOS (IV GRAFOB); 2018

GRAFOB

El desarrollo de dispositivos supramoleculares que produzcan efecto fotodinámico (EFD) en medios aeróbicos a partir de la generación fotosensibilizada de especies reactivas de oxígeno (ERO) es una temática de creciente interés actual para la desinfección de aguas y superficies, como para el tratamiento de enfermedades infecciosas.1 En este trabajo comparamos la eficiencia de EFD sobre la forma planctónica de levaduras de Candida tropicalis NCPF 3111 en PBS de una molécula fotosensibilizadora clásica como la eosina amarilla (EY), un colorante xanténico dianionico con rendimiento cuántico de generación de oxígeno singulete =0.57, ya sea en forma libre o asociada a un policatión compuesto de copolímeros de vinilbencil timina (VBT) y vinilbencil trietilamonio (VBA) de formula general POL = {[(VBT)(VBA)4]4+}25. La formación del aducto EY-POL fue estudiada por espectroscopía de absorción y emisión, tanto de régimen estacionario y dinámico. Se observó una asociación eficiente del colorante al policatión como producto de interacciones electrostáticas e hidrofóbicas, formando un aducto 1:1 a relaciones de concentración molar [POL]/[EY] > 2 y con  = 0.50. Este aducto fue fotoestable a diferencia del colorante libre en buffer. Se incubaron en oscuridad soluciones 9 M de EY libre y del aducto EY-POL ([POL]/[EY] = 5) en extractos plactónicos de C. tropicalis a 37 oC, y comprobó su localización por la fluorescencia verde de EY mediante microscopía de fluorescencia invertida. EY libre pudo penetrar la levadura distribuyéndose en todo el interior citosólico, mientras que el aducto EY-POL se adsorbió en la membrana celular. No se observó efecto citotóxico en estas condiciones. Luego los extractos fueron irradiados con un LED blanco de 100 W hasta 30 min y se tomaron alicuotas a diferentes tiempos de irradiacion para el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC).2 Para los extractos con EY libre se observó EFD (con 6 log de mortandad), los cuales también presentaron efecto de fotoblanqueo. Contrariamente, los extractos con EY-POL no mostraron EFD ni fotoblanqueo. Por lo tanto, estos resultados demuestran que si bien la formación de una estructura supramolecular EY-POL mejora la fotoestabilidad del colorante in vitro, el efecto EFD sobre la levadura queda completamente supeditado a la incorporación del sensibilizador a la levadura.