EVALUACIÓN DE LA UTILIDAD DEL DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN UN MODELO MURINO DE INFECCIÓN FÚNGICA INVASORA

CHARLTON N.; DAVEL, G.; MOTTER, A.; OLIVEIRA, A; CANTEROS C.E.; REFOJO, N; ABRANTES, R; IANNONE, L.J.

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas SADEBAC; 2018

SADEBAC

Las infecciones fúngicas invasoras (IFI) en pacientes neutropénicos presentan altos valores de morbilidad y mortalidad. La evaluación clínica de métodos de diagnóstico en estas infecciones es complicada y tediosa debido a su baja prevalencia y difícil diagnóstico. Por este motivo, el uso de modelos in vivo facilita la estandarización y evaluación de métodos de diagnóstico.El objetivo fue evaluar un método molecular para detectar ADN fúngico en un modelo murino.Se utilizaron 40 ratones Balb/C, de los cuales en 30 se indujo neutropenia (RIS) por tratamiento con ciclofosfamida (2 dosis 150 mg/kg y 100 mg/kg) y un grupo de 10 que no recibió tratamiento inmunosupresor (RIC). Los animales RIS fueron separados en 6 grupos de 5 individuos; cada uno de estos grupos fue inoculado IP con 200 μL de una suspensión 106 en SF de Aspergillus fumigatus, A. flavus, Fusarium solani, Rhizopus arrhizus, Candida albicans y el sexto grupo (control) con 200 uL de SF estéril. El grupo de 10 ratones RIC fue inoculado con suspensiones fúngicas según el esquema anterior, a razón de 2 ratones por hongo. A las 96 h se extrajeron bazo, hígado, corazón, los riñones separadamente y pulmón de cada uno de los animales de cada grupo previa eutanasia siguiendo las recomendaciones de la CICUAL institucional. Las 240 muestras fueron procesadas por métodos microbiológicos convencionales (examen directo y cultivo) y para estudios moleculares.El ADN fue extraído con el kit QIAamp DNA Blood&Tissue según recomendaciones del fabricante. Se utilizó una PCR que amplifica la región ITS2 del ADN ribosomal (PCR-Seq).Las secuencias obtenidas fueron comparadas con las depositadas en el GenBank utilizando el software BLASTn. Para evaluar la concordancia entre el diagnóstico convencional y la PCR-Seq se utilizó el índice de Kappa.Los métodos convencionales y moleculares analizados individualmente y por agente permitieron detectar el hongo entre 19/30 (63%) y 26/30 (87%) muestras analizadas. El método molecular fue entre un 7-10% más eficiente para detectar la IFI en todos los patógenos, salvo en los ratones infectados con C. albicans donde el diagnóstico convencional fue un 3% más eficiente. El análisis conjunto de ambos métodos permitió detectar el hongo entre 21/30 (70%) y 30/30 (100%). El método molecular permitió identificar el 100% de microorganismos inoculados. El bazo y el hígado fueron los órganos donde ambos métodos fueron más eficientes.CONCLUSIONES. Los datos sugieren que los métodos moleculares son más eficientes que los convencionales, sin embargo, en las IFIS la utilización de ambos métodos (convencional y molecular) mejora el diagnóstico. El método molecular permitió identificar sin ambigüedades los microorganismos inoculados.Palabras claves: aspergilosis invasora, PCR, ITS2, modelo animal