Caracterización Funcional de ISAba825, una secuencia de inserción activa que modula la plasticidad genómica en Acinetobacter baumannii

RAVASI P; LIMANSKY A.S.; VIALE; MUSSI M. A.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Introducción: Hemos reportado recientemente que la pérdida del canal de membrana externa para aminoácidos básicos de A. baumannii, CarO, como resultado de la inactivación insercional natural de su gen codificante por secuencias de inserción (IS), se correlaciona con la susceptibilidad reducida a carbapenemes. Una de estas IS, ISAba825, previamente no reportada y recientemente asignada a la familia IS982, generó una duplicación de 7-pb (ATCGTTA) en el sitio blanco de inserción en el gen carO. Objetivos: Evaluar la funcionalidad de ISAba825 así como su potencial rol modulador de plasticidad genómica en A. baumannii. Materiales y Métodos: A fin de evaluar la funcionalidad de ISAba825, generamos una nueva IS recombinante (ISAba825:Kn) conteniendo un gen de resistencia a kanamicina. Los eventos de transposición fueron evaluados utilizando como hospedadores las cepas de A. baumannii ATCC 17978, E. coli DH5á y Acinetobacter baylyi ADP1, las cuales fueron transformadas con un plásmido suicida conteniendo ISAba825::Kn. Los eventos de transposición se evaluaron mediante selección de clones resistentes a kanamicina, PCR usando cebadores específicos y confirmación de la presencia de la IS mediante secuenciación. Resultados: ISAba825::Kn presentó un estrecho rango de hospedador para la transposición, detectándose este tipo de eventos sólo en A. baumannii ATCC 17978. En esta bacteria, el blanco preferencial de ISAba825::Kn resultó ser el plásmido endógeno pAB2, encontrándose en todos los casos insertada en un sitio AACCCT. Por otra parte, encontramos en la cepa clínica Ab880 la presencia de ISAba825 corriente arriba del gen blaOXA-58, el cual codifica para una oxacilinasa capaz de hidrolizar carbapenemes. Estudios de southern blot y secuenciación mostraron que ISAba825- blaOXA- 58 se encontraba en una sola copia en un plásmido al que denominamos pAb880. Estudios de RACE 5´ indicaron en esta cepa la expresión de un transcripto resultante de la generación de un promotor híbrido alternativo entre ISAba825 y secuencias flanqueantes al sitio de inserción corriente arriba de blaOXA-58. La transformación de la cepa ATCC 17978 con pAb880 mostró el aumento de 32 veces el valor de CIM a imipenem, y de 16 veces a meropenem en relación a la cepa sin transformar. Finalmente, el análisis de la distribución de ISAba825 dentro del género Acinetobacter mostró la presencia de la misma sólo en cepas resistentes a carbapenemes de A. baumannii. Conclusiones: La presencia de ISAba825 en cepas resistentes a carbapenemes, sumado a su proximidad al gen blaOXA-58, y la inactivación de carO mediada por ISAba825, nos lleva a proponer un rol para ISAba825 en la modulación del incremento de la resistencia a carbapenemes en A. baumannii.