EXPRESION RECOMBINANTE Y PURIFICACION DE UN PEPTIDO NATRIURETICO DE Citrus sinensis

GARAVAGLIA, B.S.; FICARRA, F.A.; GAROFALO, C.G.; ZIMARO, T.; GOTTIG, N.; JORGELINA OTTADO

Rosario

Jornada; IV Jornada de Ciencia y Tecnología 2010 UNR; 2010

Los péptidos natriuréticos de plantas (PNPs) son una clase de moléculas móviles que han sido inicialmente reconocidas en plantas por anticuerpos contra péptidos natriuréticos atriales (ANP) de vertebrados y promueven la apertura de estomas, el flujo de iones, la regulación del volumen del protoplasto y el aumento de la toma de agua del tejido. Los PNPs modulan la homeostasis de iones y agua a través del aumento rápido y transiente de los niveles de cGMP celular. En este trabajo nos hemos propuesto clonar el ADNc que codifica para una PNP de naranja (Citrus sinensis) en un vector de expresión en la bacteria Escherichia coli y purificarlo a homogeneidad. Para tal fin hemos modificado el vector pET32 y hemos ligado el ADNc que al mismo. La proteína de fusión obtenida luego de realizar la inducción de la expresión de la misma en bacterias está conformada por la proteína tioredoxina, una secuencia de seis histidinas que permite la purificación mediante columnas de afinidad y la PNP madura de C. sinensis. Este polipéptido fue purificado utilizando una resina comercial y posteriormente sometido a proteólisis con trombina a fin de obtener PNP madura (CsPNP), libre del resto de la fusión. Estudios previos de nuestro grupo muestran que los PNPs son capaces de mejorar la eficiencia fotosintética del tejido vegetal. Por lo tanto CsPNP fue evaluada en su capacidad de mejorar la eficiencia fotosintética de hojas de naranja mediante medidas de fluorescencia de la clorofila. Nuestros resultados demuestran que CsPNP al igual que otros péptidos natriuréticos de plantas es capaz de mejorar la eficiencia fotosintética del tejido vegetal. Por lo tanto podemos concluir que obtuvimos una proteína vegetal pura recombinante y activa expresada en un organismo procariota.