HISTORIA EVOLUTIVA DE HBHA COMO FACTOR DE VIRULENCIA EN MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

GRAMAJO, H.; LANFRANCONI M.P.; ALVAREZ H.M.; ARABOLAZA, A.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología - CAM 2019. V Congreso Argentino de V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos - CLAMME 2019; 2019

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introduccióny Objetivos: HBHAes una hemaglutinina de superficie que se une a heparina y media la adherenciade Mycobacterium tuberculosis a células epiteliales y macrófagos facilitando ladiseminación extrapulmonar. Además de encontrarse en este patógeno derelevancia mundial, HBHA se ha detectado en otras especies tanto saprófitascomo patógenas del género Mycobacterium. El gen ortólogo a hbha en Rhodococcus se denomina tadA ycodifica para una proteína estructural de las inclusiones lipídicas en estegénero paradigma de la oleagenicidad. Si bien se diferencian a nivel delocalización y función, el contexto génico es similar; y tanto hbha como tadAestán flanqueados por un regulador transcripcional (TR) y una proteína demembrana (MP). El grado de sintenia conservado entre ambas actinobacterias poneen evidencia un origen evolutivo común para TadA y HBHA. El objetivo de estetrabajo fue presentar un escenario evolutivo que explique cómo HBHA fuecooptado como factor de virulencia fundamental para Mycobacteriumtuberculosis.Materiales y Métodos: Para estudiar en profundidad elcluster génico TR-HBHA-MP en actinobacterias y en particular entre especies de Mycobacterium, se analizaron los genomasbacterianos de cada especie mediante el uso de herramientas bioinformáticas(BLAST, SoftBerry). Para determinar si HBHA conservó a lo largo de su evoluciónsu capacidad de unirse a inclusiones lipídicas, se estudió su localizaciónmediante la expresión heteróloga de la fusión HBHAM t BGFP en Rhodococcus opacus PD630 y su análisis por microscopíaconfocal. Resultados:El estudio bioinformáticocomparativo permitió detectar variabilidad en la longitud de la región intergénicaentre TR y HBHA en diferentes especies del género Mycobacterium. Esta región es más larga en micobacteriaspatógenas, salvo M. abscessus que divergió tempranamente en la evolución delgénero, mientras que tiene menor longitud en mycobacterias saprófitas y en Rhodococcus, donde estos dos genes contiguosse solapan. Además de la mayor extensión de la región intergénica, sedetectaron diferentes regiones promotoras río arriba de HBHA que controlan suexpresión. Las mismas solo se encontraron en patógenos tales como Mycobacteriumtuberculosis, Mycobacterium canettii y Mycobacterium bovis. La expresión heteróloga de HBHA en Rhodococcus opacus PD630permitió demostrar que HBHA colocaliza con las inclusiones lipídicas al analizarlas células teñidas con Rojo Nilo que expresaban la fusión HBHAM t BGFP por microscopía confocal. Este resultado se observótanto en condiciones que estimulan el crecimiento como en aquellas quepromueven la acumulación de lípidos neutros. Conclusiones: El conjunto de resultados obtenidos sugiere que, si bienHBHA fue cooptada para desarrollar una función que favorezca el procesoinfectivo en algunas micobacterias patógenas, no habría perdido su capacidadancestral de unirse a inclusiones lipídicas. Por último, se propone que laregulación diferencial de HBHA, así como variaciones en su secuenciaaminoacídica explicarían las diferencias funcionales y espaciotemporales deeste factor de virulencia.